Perbezaan Utama – Pengekstrakan DNA lwn RNA
Kajian DNA dan RNA adalah aspek penting untuk memahami konsep asas biologi molekul, bioteknologi dan genetik. Pengekstrakan sampel DNA dan RNA tulen adalah perlu untuk menjalankan prosedur eksperimen semasa kajian ini. Perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA ialah proses pengekstrakan DNA memurnikan DNA manakala pengekstrakan RNA memurnikan RNA. Proses pengekstrakan DNA mempunyai tiga langkah berbeza: lisis sel dan katabolisme lipid dan protein membran, penggumpalan katabolit dengan larutan garam pekat dan pemendakan DNA dengan etanol. Prosedur tiga langkah mungkin terdiri daripada dua langkah pilihan. Proses penulenan RNA terdiri daripada empat langkah berbeza: penambahan guanidium tiosianat untuk lisis sel, denaturasi protein termasuk ribonuklease, pemisahan RNA dengan penambahan kloroform dan fenol dan pencucian mendakan menggunakan etanol.
Apakah Pengekstrakan DNA?
Pengekstrakan DNA ialah proses fizikal dan kimia yang digunakan untuk membersihkan DNA daripada sampel. Pengekstrakan DNA merupakan aspek penting dalam konteks biologi molekul dan sains forensik. Proses ini terdiri daripada tiga langkah asas. Pada mulanya, sel-sel yang menarik perlu diperolehi. Seterusnya, lisis sel dipermudahkan untuk memecahkan membran sel, yang membuka sel dan mendedahkan sitoplasma bersama-sama dengan DNA. Surfaktan atau detergen lain boleh digunakan untuk melisiskan lipid daripada membran sel manakala protein yang ada dikatabolismekan oleh protease. Ini adalah langkah pilihan. Setelah sel dilisiskan, penggumpalan molekul yang dikatabolisme dipermudahkan oleh larutan garam pekat. Ia diikuti dengan sentrifugasi larutan yang memisahkan gumpalan serpihan daripada DNA. Pada peringkat ini, DNA yang dibezakan dicampur dengan reagen dan garam yang digunakan semasa kitaran sel.
Rajah 01: Pengekstrakan DNA
Untuk memurnikannya lagi, langkah berikut boleh digunakan. Satu kaedah ialah pemendakan etanol, yang melibatkan pencampuran etanol sejuk ais dengan sampel DNA yang diasingkan. DNA tidak larut dalam alkohol dan dengan itu menghasilkan pelet disebabkan oleh pengagregatan molekul DNA bersama-sama. Natrium asetat ditambah dalam proses ini untuk meningkatkan tahap pemendakan dengan meningkatkan kekuatan ionik. Sebagai tambahan kepada proses pemendakan etanol, proses pengekstrakan fenol-kloroform juga boleh didorong untuk ini. Dalam kaedah ini, fenol mendenaturasi protein yang terdapat dalam sampel. Setelah disentrifugasi, protein yang didenaturasi akan kekal dalam fasa organik manakala molekul DNA yang bercampur dengan kloroform akan hadir dalam fasa akueus. Kloroform akan mengeluarkan sisa fenol. Setelah pengekstrakan selesai, DNA disimpan dalam larut dalam penimbal TE atau air ultra tulen.
Apakah Pengekstrakan RNA?
Pemurnian RNA ialah proses di mana RNA disucikan daripada sampel biologi. Oleh kerana kehadiran ribonuklease dalam sel dan tisu, proses ini rumit. Enzim ribonuclease mempunyai keupayaan untuk merendahkan RNA dengan cepat. Sifat kimia ribonuklease adalah sangat stabil, dan sukar untuk menyahaktifkannya. Meneutralkan ribonuklease adalah pilihan. Oleh kerana enzim ini terdapat di mana-mana dalam sel dan tisu, teknik khas dibangunkan untuk pengekstrakan RNA. Daripada banyak kaedah, kaedah biasa ialah pengekstrakan Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform.
Rajah 02: Pengekstrakan RNA
Kaedah pengekstrakan Guanidinium thiocynate-phenol-chloroform bergantung pada sentrifugasi dan pemisahan fasa. Campuran yang akan disentrifugasi terdiri daripada sampel akueus dan larutan tepu air yang terdiri daripada fenol dan kloroform. Setelah disentrifugasi, larutan terdiri daripada fasa akueus atas dan fasa organik yang lebih rendah di bawah keadaan pH neutral (pH 7-8). RNA hadir dalam fasa akueus. Fasa organik biasanya terdiri daripada protein terlarut dalam fenol dan lipid terlarut dalam kloroform. Agen chaotropic (molekul yang mempunyai keupayaan untuk memecahkan ikatan hidrogen antara molekul air) ditambah; ini dikenali sebagai, guanidinium thiocyanate. Ejen ini mempunyai keupayaan untuk menyahtukarkan protein yang termasuk ribonuklease yang boleh merendahkan RNA dan terlibat dalam lisis sel. Ia juga memisahkan rRNA daripada protein ribosom. Langkah terakhir penulenan RNA ialah membasuh pemendakan fasa akueus dengan etanol. RNA juga boleh ditulenkan menggunakan nitrogen cecair.
Apakah Persamaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA?
- Kedua-dua proses pengekstrakan menggunakan bahan kimia berbahaya seperti fenol dan kloroform.
- Pengemparan ialah teknik penting untuk kedua-dua proses.
- Ethanol digunakan untuk mencuci mendakan dan mendapatkan DNA atau RNA yang telah dimurnikan.
Apakah Perbezaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA?
Pengekstrakan DNA lwn RNA |
|
| Pengekstrakan DNA ialah proses yang mengekstrak DNA daripada organisma atau sampel. | Pengekstrakan RNA ialah proses yang mengekstrak RNA daripada sampel. |
| Langkah | |
| Proses pengekstrakan DNA terdiri daripada tiga langkah berbeza dengan dua langkah pilihan. | Proses pengekstrakan RNA terdiri daripada empat langkah berbeza. |
| Reagen | |
| Surfaktan, protease (pilihan), alkohol, kloroform, fenol, natrium asetat digunakan untuk pengekstrakan DNA. | Guanidium thiocyanate, kloroform, fenol, etanol digunakan untuk pengekstrakan RNA. |
Ringkasan – Pengekstrakan DNA lwn RNA
Pengekstrakan DNA dan RNA adalah aspek penting dalam prosedur eksperimen untuk kajian biologi molekul, genetik dan bioteknologi. Kedua-dua proses melibatkan reagen yang sama, tetapi pengekstrakan RNA menggunakan reagen khas yang dikenali sebagai Guanidium thiocyanate yang mengurangkan aktiviti ribonucleases. Ini ialah perbezaan utama antara pengekstrakan DNA dan RNA.
Muat turun Versi PDF Pengekstrakan DNA lwn RNA
Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti dalam nota petikan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan Antara Pengekstrakan DNA dan RNA
