Perbezaan Utama – Trypsinization Hangat vs Sejuk
Trypsinization Hangat dan Sejuk ialah dua kaedah yang digunakan dalam pengasingan enzimatik sel dalam pengkulturan sel haiwan. Perbezaan utama antara trypsinization hangat dan sejuk, seperti namanya, bergantung pada suhu di mana trypsin ditambahkan untuk pengasingan selular. Trypsinization hangat berlaku dalam keadaan suhu yang lebih tinggi (36.5 – 37 0C) manakala trypsinization sejuk berlaku dalam keadaan suhu rendah.
Semasa proses pengkulturan sel primer sel haiwan, terdapat tiga kaedah utama yang digunakan dan telah terbukti berjaya. Tiga kaedah termasuk pengasingan mekanikal sel, pengasingan enzimatik sel dan teknik eksplan utama. Pengasingan enzimatik sel membawa kepada pengasingan sel dan ia dilakukan oleh enzim yang merendahkan protein trypsin. Oleh itu, proses ini dikenali sebagai Trypsinization. Trypsinization boleh dilakukan di bawah dua keadaan berbeza iaitu Warm Trypsinization dan Cold Trypsinization. Trypsinization hangat ialah kaedah merawat sel dengan tripsin dalam keadaan hangat pada suhu 36.5 – 37 0C. Trypsinization sejuk ialah proses rawatan trypsin yang berlaku dalam keadaan yang lebih sejuk, sebaik-baiknya dalam ais yang mengekalkan suhu yang sangat rendah.
Apakah itu Trypsinization Hangat?
Trypsinization boleh dilakukan untuk mengasingkan komponen selular untuk mengasingkan sel untuk menghasilkan kultur sel primer. Trypsin ialah enzim penguraian protein, dan campuran enzim yang digunakan dalam trypsinization boleh sama ada ekstrak mentah atau produk tulen. Ekstrak mentah dikatakan lebih cekap dalam lisis protein dan perpecahan sel kerana ia mengandungi enzim degradasi lain.
Trypsinization hangat ialah kaedah enzimatik yang paling biasa digunakan untuk pengasingan sel yang berlaku di bawah keadaan suhu yang lebih tinggi. Sebelum rawatan dengan trypsinization, tisu yang dikehendaki dicincang menjadi kepingan yang lebih kecil. Ia memudahkan proses pengasingan yang mudah. Tisu yang dicincang kemudiannya dibasuh dalam media khas yang dikenali sebagai medium Dissection Basal S alt.
Setelah selesai langkah mencuci, sel-sel diubah menjadi kelalang yang mengandungi enzim aktif, iaitu tripsin. Memandangkan teknik ini membayangkan protokol trypsinization yang hangat, tripsin diletakkan pada suhu sekitar 37 0C selama kira-kira empat jam.
Rajah 01: Trypsin
Kandungan dicampur dan digoncang dengan menggunakan kaedah sentrifugasi untuk memudahkan protokol dan mempercepatkan proses pengasingan. Setelah masa yang disyorkan dicapai, sel-sel boleh diperoleh daripada supernatan. Sel-sel yang diperoleh daripada supernatan kemudiannya diinkubasi pada suhu dan masa tertentu.
Apakah itu Trypsinization Sejuk?
Trypsinisasi sejuk ialah jenis trypsinization lain yang berlaku dalam keadaan sejuk. Dalam teknik ini, sel-sel yang dicincang dan dicuci diletakkan dalam botol di atas ais dan kemudian direndam dengan trypsin. Tempoh rendaman adalah lebih lama – kira-kira 6 – 24 jam.
Selepas selesai prosedur perendaman, tripsin dikeluarkan daripada lisat sel, dan kepingan tisu diinkubasi selanjutnya pada suhu 37 0C selama kira-kira 20 – 30 minit. Pengasingan sel-sel berlaku dengan pemipetan berulang bagi campuran tisu. Ini akan membolehkan sel-sel berpisah daripada membran dan datang ke supernatan. Sebaik sahaja sel berada dalam supernatan, ia diinkubasi dan membesar pada suhu dan tempoh masa yang dikehendaki.
Kaedah trypsinization sejuk mempunyai beberapa kelebihan
- Hasil sel berdaya maju yang lebih tinggi kerana kerosakan sel diminimumkan. Kerosakan sel diminimumkan dengan tidak menggunakan langkah sentrifugasi.
- Kaedah yang sangat mudah.
- Kurang susah payah.
Had utama kaedah trypsinization sejuk ialah kuantiti yang banyak tidak boleh digunakan dalam satu kejadian.
Apakah Persamaan Antara Trypsinization Hangat dan Sejuk?
- Kedua-dua proses Trypsinization Hangat dan Sejuk menggunakan enzim tripsin untuk pengasingan sel.
- Kedua-dua proses Trypsinization Hangat dan Sejuk digunakan dalam prosedur kultur sel untuk pengasingan sel.
- Dalam kedua-dua prosedur rawatan Trypsinization Hangat dan Sejuk, sel-sel berasal daripada supernatan.
Apakah Perbezaan Antara Trypsinization Hangat dan Sejuk?
Trypsinization Hangat vs Sejuk |
|
| Trypsinization hangat ialah kaedah merawat sel dengan tripsin dalam keadaan hangat pada suhu 36.5 – 37 0. | Trypsinisasi sejuk ialah proses rawatan tripsin yang berlaku dalam keadaan lebih sejuk, sebaik-baiknya dalam ais yang mengekalkan suhu yang sangat rendah. |
| Protokol | |
| Kepingan tisu yang dicincang dikekalkan pada 37 0C secara berterusan sepanjang prosedur. | Kepingan tisu yang dicincang pada mulanya dikekalkan pada suhu sejuk ais dan kemudian dikekalkan pada 37 0. |
| Suhu | |
| Trypsinization hangat berlaku pada 36.5 – 37 0 | Trypsinisasi sejuk berlaku pada suhu sejuk ais. |
| Masa Digunakan | |
| Masa yang lebih singkat diperlukan untuk keseluruhan proses (sekitar 4 jam) trypsinization hangat. | Masa yang lebih lama diperlukan (sekitar 6 – 24 jam) untuk trypsinization sejuk. |
| Hasil Sel Berdaya maju | |
| Rendah dalam trypsinization hangat. | Tinggi dalam trypsinization sejuk. |
| Penggunaan Emparan | |
| Pesentrifugasi diperlukan untuk pengasingan sel dalam trypsinization hangat. | Pesentrifugasi tidak diperlukan dalam trypsinization sejuk. |
| Kuantiti Tisu Awal untuk Trypsinization | |
| Kuantiti tisu yang lebih besar boleh digunakan dalam trypsinization hangat. | Kuantiti tisu yang lebih kecil boleh digunakan dalam trypsinization sejuk. |
| Kerosakan Sel | |
| Tinggi kerana sentrifugasi dalam trypsinization hangat. | Kurang kerana trypsinization sejuk. |
Ringkasan – Trypsinization Hangat vs Sejuk
Trypsinization ialah kaedah menggunakan enzim yang merendahkan protein trypsin untuk pengasingan dan penyediaan kultur sel primer semasa proses kultur sel. Terdapat dua teknik utama trypsinization berdasarkan suhu yang digunakan semasa prosedur. Mereka adalah trypsinization hangat dan sejuk. Trypsinization hangat dijalankan pada suhu 37 0C manakala trypsinization sejuk dijalankan dalam keadaan sejuk ais. Walaupun trypsinization sejuk mengambil masa yang lebih lama untuk disiapkan, ia dikatakan mempunyai hasil sel berdaya maju yang lebih tinggi. Ini disebabkan oleh fakta bahawa kerosakan sel diminimumkan dalam trypsinization sejuk kerana ia tidak menggunakan langkah sentrifugasi yang kuat. Ini ialah perbezaan antara trypsinization hangat dan sejuk.
