Perbezaan Utama – YAC lwn M13 Phage Vector
Pengklonan DNA ialah proses penting yang membolehkan pembiakan serpihan DNA penting organisma. Ia memerlukan penyambungan DNA tertentu dengan DNA vektor untuk mencipta DNA rekombinan yang berubah menjadi organisma perumah. Vektor ialah molekul DNA yang bertindak sebagai kenderaan untuk membawa bahan genetik asing ke dalam sel atau organisma lain. Ia sepatutnya mampu mereplikasi di dalam organisma perumah dan menghasilkan berbilang salinan DNA rekombinan. Terdapat pelbagai jenis vektor yang digunakan dalam pengklonan DNA. Kromosom buatan ragi (YAC) dan vektor fag M13 adalah dua jenis di antaranya. Perbezaan utama antara vektor faj YAC dan M13 ialah YAC ialah kromosom tiruan yang mereplikasi dalam sel yis manakala vektor faj M13 ialah DNA bulat terkandas tunggal bakteria M13 yang mereplikasi dalam sel E Coli.
Apakah itu Vektor YAC?
YAC ialah kromosom buatan buatan yang mempunyai keupayaan untuk membawa segmen besar DNA asing dan mereplikasi dalam sel yis. Ia mempunyai sentromer, telomere dan urutan replikasi autonomi yang penting untuk replikasi dan kestabilan. YAC juga harus mempunyai penanda terpilih atau penanda dan tapak sekatan untuk menjadikannya vektor pengklonan yang berkesan. Jujukan besar antara 1000 kb hingga 2000 kb boleh dimasukkan ke dalam YAC dan dipindahkan ke dalam yis.
Rajah 01: Vektor YAC
Apakah itu M13 Phage Vector?
Bacteriophage M13 ialah virus yang menjangkiti dan mereplikasi dalam E Coli. Genom bakteria M13 bersaiz kecil, kira-kira 6.7 kb. Ia adalah DNA deria beruntai tunggal, bulat dan positif. Virus ini secara khusus menjangkiti bakteria E Coli melalui F pilus. Sebaik sahaja ia memasuki ssDNA ke dalam bakteria, ia mensintesis untaian pelengkapnya dan menjadi dsDNA atau bentuk replikatif (RF) M13. RF boleh berkelakuan seperti plasmid dalam organisma hos. DsDNA mereplikasi dalam E Coli dan menghasilkan ssDNA yang mengandungi fag baharu. Fag baru ini dilepaskan secara berterusan daripada E Coli tanpa membunuh sel perumah. Walau bagaimanapun, jangkitan melambatkan pertumbuhan E Coli. dsDNA boleh diekstrak daripada sel bakteria dan digunakan sebagai vektor dalam pengklonan DNA. Mereka dikenali sebagai vektor phage M13. Ia boleh dimanipulasi dengan mudah dan digunakan sama seperti vektor plasmid.
Keupayaan inheren jangkitan phages M13 ini berfungsi sebagai kelayakan yang baik untuk digunakan sebagai vektor dalam pengklonan gen. Apabila membangunkan M13 menjadi vektor, beberapa elemen harus dimasukkan ke dalam genomnya. Mereka adalah, gen untuk protein penindas lac (lac I), kawasan operator-proksimal gen lac Z, promoter lac dan tapak pengklonan berganda (polylinker). Apabila dsDNA M13 digunakan sebagai vektor, ia boleh dianggap sebagai vektor plasmid. Walau bagaimanapun, penggunaan ssDNA M13 mempunyai kelebihan dalam penjujukan DNA dan mutagenesis terarah tapak.
Memandangkan vektor fag M13 mempunyai beberapa tapak pengklonan di rantau lacZ, vektor yang digabungkan semula boleh dikenal pasti dengan mudah melalui pemeriksaan koloni biru/putih pada plat agar yang mengandungi IPTG dan X-Gal. Plak biru yang dihasilkan pada plat tidak mengandungi fag yang digabungkan semula. Oleh itu, fag dengan sisipan boleh dipilih untuk tujuan pengklonan.
Rajah 02: Bakteriofaj M13
Apakah perbezaan antara YAC dan M13 Phage Vector?
YAC lwn M13 Phage Vector |
|
| YAC ialah kromosom kejuruteraan genetik yang mempunyai keupayaan untuk membawa sebahagian besar DNA asing dan mereplikasi dalam sel yis. | Vektor faj M13 ialah vektor virus yang dibangunkan oleh bakteriofaj M13 yang digunakan untuk memasukkan DNA asing ke dalam E Coli. |
| Tujuan | |
| YAC direka untuk mengklon serpihan besar DNA genom kepada yis. | vektor faj M13 digunakan untuk memasukkan DNA asing ke dalam E Coli. |
| Panjang Sisip | |
| YAC boleh mengandungi sisipan genomik bersaiz megabase (1000 kb – 2000 kb). | Saiz sisipan ialah kira-kira 1, 500 bps. |
| Pembinaan | |
| DNA YAC sukar ditulenkan secara utuh dan memerlukan kepekatan yang tinggi untuk menjana sistem vektor YAC. | Ia berlaku melalui rantai elektron fotosintetik kitaran. |
| Kestabilan | |
| YAC tidak stabil. | M13 phages boleh diekstrak dengan mudah. |
| Saiz | |
| Enzim ialah molekul yang lebih besar. | M13 phages adalah stabil daripada YAC. |
Ringkasan – YAC lwn M13 Phage Vector
YAC ialah sistem vektor yang dibina secara buatan menggunakan kawasan khusus kromosom yis untuk memasukkan segmen besar bahan genetik ke sel yis. Vektor faj M13 ialah sistem vektor yang berasal daripada bakteriofaj M 13 yang menggunakan E coli sebagai organisma perumah. Ini adalah perbezaan utama antara YAC dan M13 Phage Vector. Kedua-duanya sama-sama berguna dalam teknologi DNA rekombinan dan pengklonan gen.
