Perbezaan utama antara penapisan gel dan kromatografi afiniti ialah kromatografi penapisan gel bergantung pada perbezaan berat molekul atau saiz sampel analit, manakala kromatografi afiniti bergantung pada pertalian analit kepada ligan tidak bergerak.
Istilah kromatografi dalam kimia analitik merujuk kepada proses pengasingan komponen dalam campuran menggunakan teknik yang berbeza. Kromatografi ialah nama kolektif yang mewakili pelbagai bilangan kaedah yang berbeza untuk pengasingan.
Apakah itu Kromatografi Penapisan Gel?
Kromatografi penapisan gel ialah teknik analisis di mana pemisahan komponen bergantung pada perbezaan berat atau saiz molekul. Teknik ini juga dikenali sebagai kromatografi pengecualian saiz atau kromatografi penapis molekul. Teknik pemisahan dalam proses ini bergantung pada keupayaan berbeza molekul dalam sampel untuk masuk ke dalam liang medium penapisan gel.
Dalam teknik penapisan gel, fasa pegun mengandungi manik terhidrat, bahan seperti span yang mempunyai liang dimensi molekul yang mengandungi julat saiz yang sempit. Jika kita melepasi larutan akueus yang terdiri daripada molekul pelbagai saiz melalui lajur yang mengandungi "ayak molekul" ini, molekul yang lebih besar daripada liang medium penapisan bergerak dengan cepat melalui lajur. Sebaliknya, molekul yang lebih kecil memasuki liang gel dan cenderung bergerak perlahan melalui lajur. Molekul mencairkan daripada lajur mengikut susunan saiz molekul yang semakin kecil. Di sini, had pengecualian gel ialah jisim molekul bagi molekul terkecil yang tidak dapat menembusi liang gel tertentu.
Terdapat pelbagai jenis teknik penapisan gel, seperti kaedah penapisan gel tidak langsung, penapisan gel keadaan mantap, dialisis manik gel, dll. Kromatografi penapisan gel tidak langsung berguna dalam penentuan hormon tiroid bebas. Kromatografi penapisan gel keadaan mantap ialah teknik tidak langsung yang berguna kebanyakannya untuk pengukuran steroid bebas seperti kortisol, testosteron, dll. Dialisis manik gel, sebaliknya, ialah pengubahsuaian penapisan gel keadaan mantap yang secara perbandingan lebih mudah.
Apakah itu Kromatografi Perkaitan?
Kromatografi pertalian ialah teknik analisis dan kaedah pemisahan yang bergantung pada interaksi pengikatan tertentu antara ligan tidak bergerak dan pasangan pengikatnya. Beberapa contoh termasuk pengikatan antibodi-antigen, pengikatan enzim-substrat, dan pengikatan perencat enzim. Oleh itu, teknik ini mempunyai banyak aplikasi penting dalam penulenan asid nukleik, penulenan protein daripada ekstrak sel dan penulenan daripada darah.
Dalam teknik ini, sifat yang paling penting ialah imobilisasi ligan. Kita boleh menggunakan pelbagai bahan seperti akrilat dan gel silika untuk ini. Adalah penting untuk mengelakkan gangguan sterik molekul sasaran kepada ligan. Selain itu, perencat dilekatkan pada fasa pepejal. Kami memanggil perencat ini sebagai spacer. Secara klasik, spacer terdiri daripada rantai hidrokarbon.
Fasa pegun kromatografi afiniti mengandungi teras, pengatur jarak dan ligan. Kadang-kadang, ia juga mempunyai ion logam yang digabungkan dengan ligan. Fasa pepejal yang paling disukai untuk fasa pegun dalam teknik ini ialah gel agarosa kerana ia mudah disalurkan untuk mengisi dan membungkus lajur dengan katil resin dalam sebarang saiz, dan ia cukup besar untuk biomolekul mengalir dengan bebas ke dalam dan melalui manik. Ligan boleh melekat secara kovalen pada polimer manik dalam pelbagai cara. Sebatian pengatur jarak yang paling biasa ialah sianogen bromida, epoksida, epoksida dengan asid C6, dan diamin. Sebaliknya, ligan yang boleh kita gunakan berbeza mengikut sasaran, cth., antibodi-antigen, ion besi atau aluminium-fosfoprotein, avidin-biotin, glutathione-GST, chelator-Protein yang ditag-Nya, dsb.
Apakah Perbezaan Antara Penapisan Gel dan Kromatografi Afiniti?
Kromatografi ialah teknik analisis yang penting. Kromatografi penapisan gel dan kromatografi pertalian adalah dua variasi penting kromatografi. Perbezaan utama antara penapisan gel dan kromatografi pertalian ialah kromatografi penapisan gel bergantung pada perbezaan berat molekul atau saiz sampel analit, manakala kromatografi pertalian bergantung pada pertalian analit kepada ligan yang tidak bergerak.
Ringkasan – Penapisan Gel lwn Kromatografi Afiniti
Terdapat pelbagai jenis teknik kromatografi mengikut penggunaannya dan sifat sampel analit. Penapisan gel dan kromatografi pertalian adalah dua jenis teknik sedemikian. Perbezaan utama antara penapisan gel dan kromatografi afiniti ialah kromatografi penapisan gel bergantung pada perbezaan berat molekul atau saiz sampel analit, manakala kromatografi afiniti bergantung pada pertalian analit kepada ligan tidak bergerak.
