Perbezaan utama antara ujian kolorimetrik dan fluorometri ialah ujian kolorimetrik menentukan kepekatan sebatian berwarna dalam larutan manakala ujian fluorometrik menentukan mekanisme kinetik penyelesaian.
Ujian biokimia ialah teknik yang mengesan atau mengukur aktiviti molekul atau bahan biologi secara analitik. Ia adalah proses in vitro. Ujian kolorimetrik dan ujian fluorometri ialah dua jenis ujian biokimia biasa yang dijalankan di makmal. Pelbagai teknik seperti ELISA dan western blotting juga merupakan ujian biokimia yang kompleks untuk pengiraan aktiviti metabolik dan pengukuran kelakuan berfungsi biomolekul seperti protein, enzim dan molekul kecil yang lain. Jenis ujian ini digunakan untuk mengenal pasti interaksi protein-DNA, protein-RNA dan protein-protein.
Apakah itu Ujian Colorimetric?
Ujian kolorimetrik ialah teknik yang menentukan kepekatan sebatian berwarna dalam larutan. Dalam erti kata lain, ujian kolorimetrik ialah tindak balas yang membawa kepada perubahan warna akibat tindak balas enzimatik atau kimia antara reagen dan analit. Ujian kolorimetrik diamalkan dalam biokimia untuk menguji enzim, sebatian khusus, hormon, antibodi dan analit lain. Mereka menggunakan colorimeter atau spektrofotometer. Colorimeters ialah instrumen yang mencirikan sampel berwarna untuk memberikan ukuran objektif ciri warna. Spektrofotometer ialah peranti yang mengukur keamatan cahaya sebagai fungsi warna atau panjang gelombang cahaya.
Rajah 01: Ujian Kolorimetrik
Bagaimanakah Ujian Colorimetric Berfungsi?
Dalam ujian kolorimetrik, plat disediakan dengan antibodi tertentu yang terikat pada telaga. Kemudian sampel ditambah. Ini mungkin membenarkan sampel untuk mengikat antibodi. Kemudian antibodi pengesanan dan substrat ditambah ke telaga untuk bertindak balas dengan probe pengesanan. Larutan henti ditambah pada penghujung sebelum bacaan. Telaga kosong yang dipanggil kosong dibiarkan tanpa sampel. Dalam ujian kolorimetrik, lebih gelap warna, lebih besar kepekatan analit. Biasanya, hanya satu panjang gelombang diperlukan untuk mengambil bacaan. Tetapi jika terdapat ukuran rujukan, dua atau lebih panjang gelombang digunakan.
Apakah itu Ujian Fluorometrik?
Ujian fluorometri ialah teknik yang menentukan mekanisme kinetik tindak balas enzim. Ujian fluorometrik berlaku dengan pembentukan produk pendarfluor daripada substrat bukan pendarfluor atau sebaliknya. Ujian ini juga menggunakan pemindahan tenaga resonans pendarfluor (FRET) di mana, tindak balas enzimatik mengubah kedudukan dua fluorofor dalam substrat dengan itu, mengubah keamatan pendarfluor.
Rajah 02: Ujian Fluorometri
Ujian fluorometri biasanya jauh lebih sensitif daripada ujian lain. Anggaran enzim diagnostik dalam tisu, sel atau sampel cecair pesakit meningkat disebabkan sensitivitinya yang lebih tinggi.
Bagaimanakah Ujian Fluorometri Berfungsi?
Dalam ujian fluorometrik, substrat ditambah kepada sampel dalam plat, dan tindak balas pendarfluor diambil menggunakan pembaca plat. Di sini, setiap sel diukur secara berasingan. Plat legap digunakan dalam ujian fluorometrik. Ini mengurangkan penyebaran cahaya. Dua panjang gelombang diperlukan untuk jenis ujian ini. Satu panjang gelombang adalah untuk mengesan pengujaan dan panjang gelombang yang lain adalah untuk pancaran.
Apakah Persamaan Antara Colorimetric dan Fluorometrik Assay?
- Ujian warnametrik dan ujian fluorometri ialah dua jenis ujian biokimia.
- Kedua-dua ujian dijalankan untuk diagnostik perubatan.
- Ujian ini melibatkan tindak balas enzim.
- Kedua-dua ujian melibatkan substrat dan analit.
Apakah Perbezaan Antara Ujian Kolorimetrik dan Fluorometri?
Ujian kolorimetrik ialah teknik yang menentukan kepekatan sebatian berwarna dalam larutan, manakala ujian fluorometri ialah teknik yang menentukan mekanisme kinetik tindak balas enzim. Jadi, ini adalah perbezaan utama antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik. Selain itu, ujian fluorometrik adalah lebih sensitif daripada ujian kolorimetrik; Oleh itu, ujian fluorometrik mempunyai keupayaan untuk mengesan lebih banyak analit. Oleh itu, ini adalah satu lagi perbezaan penting antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik. Tambahan pula, ujian fluorometri memerlukan dua panjang gelombang, manakala ujian kolorimetrik dijalankan dengan satu panjang gelombang.
Infografik di bawah menjadualkan lebih banyak perbezaan antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik.
Ringkasan – Colorimetric vs Fluorometrik Assay
Ujian biokimia ialah proses analisis yang digunakan untuk menentukan dan mengukur tindak balas metabolik selular. Ujian kolorimetrik dan ujian fluorometrik adalah dua jenis ujian biokimia. Ujian kolorimetrik ialah tindak balas yang membawa kepada perubahan warna akibat tindak balas enzimatik atau kimia antara reagen dan analit manakala ujian fluorometrik ialah teknik yang digunakan untuk menentukan mekanisme kinetik tindak balas enzim. Kedua-dua ujian bergantung kepada tindak balas enzimatik yang melibatkan substrat dan analit. Ujian fluorometrik lebih sensitif daripada ujian kolorimetrik. Paling penting, ujian fluorometri memerlukan dua panjang gelombang, manakala ujian kolorimetrik boleh dijalankan dengan hanya satu panjang gelombang. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara ujian kolorimetrik dan fluorometrik.
