Perbezaan utama antara ujian BCA dan Bradford ialah ujian BCA memakan masa dan kurang tepat, manakala ujian Bradford adalah cepat dan tepat.
BCA dan Bradford assay ialah dua kaedah ujian penentuan kepekatan protein. Kedua-dua ujian ini mempunyai prinsip ujian yang berbeza dan perbezaan dalam ketepatannya.
Apakah BCA Assay?
ujian BCA atau ujian asid bicinchoninic ialah ujian biokimia yang berguna dalam menentukan jumlah kepekatan protein dalam larutan. Kaedah ini juga dinamakan sebagai ujian Smith sempena penciptanya, Paul K. Smith. Kaedah analisis ini menunjukkan persamaan dengan ujian protein Lowry, ujian protein Bradford atau reagen biuret. Kita boleh memerhatikan jumlah kepekatan protein dalam sampel tertentu melalui perubahan warna larutan sampel, yang berubah dari hijau ke ungu. Perubahan warna ini berlaku mengikut kadar kandungan protein. Selepas itu, kita boleh menggunakan teknik kolorimetrik untuk menganalisis keamatan warna dan kandungan protein dalam sampel.
Kaedah BCA Anggaran Protein
Apabila mempertimbangkan mekanisme ujian BCA, larutan BCA biasa mengandungi larutan beralkali tinggi dengan pH hampir kira-kira 11.25, dan ramuan dalam larutan ini termasuk asid bicinchoninic, natrium karbonat, natrium bikarbonat, natrium tartrat, dan kuprum(II) sulfat pentahidrat. Ujian ini bergantung terutamanya kepada dua tindak balas kimia: pengurangan kuprum(II) kepada kuprum(I) oleh ikatan peptida dalam protein dan pengkelasi dua molekul asid bicinchoninic dengan ion kuprum(I), menghasilkan kompleks berwarna ungu yang boleh menyerap cahaya pada panjang gelombang 562 nm. Dalam tindak balas pertama, jumlah kuprum(II) yang dikurangkan oleh ikatan peptida adalah berkadar dengan jumlah protein dalam sampel.
Apakah Bradford Assay?
Ujian Bradford ialah kaedah analisis spektroskopi yang berguna dalam mengukur kepekatan protein dalam larutan. Kaedah ini telah dibangunkan oleh Marion M. Bradford pada tahun 1976, dan ia merupakan kaedah yang agak cepat dan tepat.
Tindak Balas Warna Protein dan Reagen Bradford
Kita boleh menggunakan kaedah ini untuk menentukan kepekatan jumlah protein dalam sampel. Tindak balas kimia yang berlaku dalam sampel semasa ujian ini bergantung sepenuhnya pada komposisi asid amino protein dalam sampel.
Kaedah Bradford Anggaran Protein
Apabila mempertimbangkan kaedah ujian ini, ia adalah ujian protein kolorimetrik yang berdasarkan anjakan penyerapan pewarna bernama Coomassie Brilliant Blue G-250. Secara amnya, pewarna ini wujud dalam tiga bentuk iaitu bentuk anionik (biru), bentuk neutral (hijau) dan bentuk kationik (merah). Oleh itu, dalam keadaan berasid, pewarna menukar warnanya daripada merah kepada biru. Ini kerana pengikatan protein dengan pewarna. Sebaliknya, jika tiada protein untuk mengikat dengan pewarna, perubahan warna tidak kelihatan, larutan mendapat warna merah-coklat. Pewarna ini mampu membentuk kompleks bukan kovalen yang kuat dengan kumpulan karboksil protein melalui daya Van der Waal dan tarikan elektrostatik.
Apakah Perbezaan Antara BCA dan Bradford Assay?
BCA dan Bradford assay ialah dua kaedah ujian penentuan kepekatan protein. Kedua-dua ujian ini mempunyai prinsip ujian yang berbeza dan perbezaan ketepatannya. Perbezaan utama antara ujian BCA dan Bradford ialah ujian BCA memakan masa dan kurang tepat, manakala ujian Bradford adalah cepat dan tepat.
Infografik berikut meringkaskan perbezaan antara ujian BCA dan Bradford dalam bentuk jadual.
Ringkasan – BCA lwn Bradford Assay
ujian BCA atau ujian asid bicinchoninic ialah ujian biokimia yang berguna dalam menentukan jumlah kepekatan protein dalam larutan. Ujian Bradford ialah kaedah analisis spektroskopi yang berguna dalam mengukur kepekatan protein dalam larutan. Perbezaan utama antara ujian BCA dan Bradford ialah BCA memakan masa dan kurang tepat, manakala ujian Bradford adalah pantas dan tepat.
