Perbezaan Utama – Phusion vs Taq Polymerase
DNA polimerase ialah enzim yang digunakan secara meluas dalam teknik biologi molekul dan juga terdapat secara semula jadi dalam semua organisma yang menjalani replikasi DNA. Mereka adalah enzim pempolimeran utama yang terlibat semasa replikasi. Polimerase DNA mampu menambah nukleotida pada hujung 3’ bebas untai DNA dengan itu menyebabkan lanjutan untaian baru. Pada masa ini, disebabkan perkembangan biologi molekul dalam diagnostik penyakit dan aplikasi industri, adalah penting untuk mengeluarkan polimerase yang mempunyai pelbagai sifat berfaedah. Ini meningkatkan ketepatan kaedah dan menjadikannya teknik yang lebih pantas. Phusion dan Taq polimerase ialah dua enzim polimerase termostabil yang dihasilkan secara komersial yang digunakan dalam aplikasi molekul khas. Phusion ialah polimerase DNA yang diasingkan daripada Pyrococcus furiosus dan digunakan terutamanya dalam eksperimen pengklonan untuk meningkatkan kesetiaan. Taq DNA Polymerase ialah polimerase DNA standard yang digunakan dalam Polimerase Chain Reaction (PCR), dan ia diasingkan daripada bakteria termostabil; Thermus aquaticus. Perbezaan utama antara kedua-dua enzim ialah mikroorganisma sumber. Phusion diasingkan daripada extremophile, Pyrococcus furiosus manakala, Taq polymerase diasingkan daripada thermophile, Thermus aquaticus.
Apakah itu Phusion?
Phusion DNA polymerase ialah polimerase baru yang dihasilkan dengan mengasingkan enzim daripada Pyrococcus furiosus, yang merupakan Archaea ekstremofilik. Mikrob ini tinggal dalam keadaan suhu yang sangat tinggi, dengan itu menjadikan polimerase sebagai polimerase yang sangat tahan haba. Phusion polimerase digunakan untuk mendapatkan kesetiaan melampau ke atas polimerase termostabil konvensional; Taq polimerase. Phusion polymerase mampu menguatkan templat panjang sehingga 7.5kb DNA genomik. Kapasiti pempolimeran optimum polimerase Phusion ialah pada 720 C. Phusion juga digunakan dalam produk pengklonan untuk penjujukan, analisis ekspresi dan analisis mutasi.
Phusion DNA polymerase mempunyai aktiviti exonuclease 3’ – 5’. Ini membolehkan membaca pruf helai yang baru disintesis selepas sintesis. Oleh itu, ketidakpadanan nukleotida mudah diperbaiki. Oleh itu, ia mempunyai kadar ralat yang lebih rendah. Kelebihan keseluruhan Phusion polymerase ialah;
- Kesetiaan Melampau
- Kelajuan Tinggi dan masa sambungan yang dikurangkan
- Reaksi Teguh dan memerlukan pengoptimuman minimum
- Hasil Tinggi
Rajah 01: Phusion
Kelemahan utama Phusion polymerase ialah ia dihalang dengan kehadiran deoxyuridine triphosphate (dUTP). Apabila dUTP terkumpul dalam campuran tindak balas, ia mungkin menghalang tindakan Phusion polimerase. Ini dicegah dengan merawat campuran tindak balas dengan dUTPase sebelum menambah enzim. Pada masa ini, varian tahan dUTP polimerase Phusion yang dikenali sebagai Pfu Turbo digunakan dan bukannya polimerase Phusion sebagai ubat kepada masalah ini.
Apakah Taq Polymerase?
Penciptaan polimerase DNA Taq telah merevolusikan bidang biologi molekul. Ia menyelesaikan masalah utama dalam amplifikasi DNA. Taq DNA polymerase ialah enzim polimerase stabil haba yang diekstrak dan diasingkan daripada bakteria termofilik, Thermus aquaticus. Penemuan enzim ini membawa kepada pembangunan PCR. Enzim ini telah membenarkan penggunaan tindak balas rantai polimerase dalam penguatan DNA dan bukannya teknik pengklonan yang susah payah. PCR kini digunakan dalam diagnostik molekul, bidang pertanian dan perindustrian dengan banyak variasi baharu ditambahkan pada teknik tersebut.
Rajah 02: Taq Polymerase
Taq DNA polymerase berfungsi pada julat suhu optimum antara 720C – 800C. Taq DNA polymerase memerlukan co-factor; magnesium untuk fungsinya. Taq polymerase tidak mempunyai kebolehan proofreading 3' – 5', oleh itu, kadar ralat Taq DNA polymerase adalah tinggi berbanding dengan jenis polimerase DNA yang lebih baru seperti Phusion polymerase dll. Tetapi, populariti Taq DNA polymerase kekal sebagai sama di seluruh dunia sains kerana kemudahan dan fleksibiliti enzim.
Apakah Persamaan Antara Phusion dan Taq polymerase?
- Kedua-dua enzim Phusion dan Taq polimerase ialah enzim pempolimeran yang mampu menambah nukleotida pada hujung bebas 3’ untaian DNA.
- Kedua-dua polimerase Phusion dan Taq memerlukan jujukan primer untuk memulakan pempolimeran.
- Kedua-dua polimerase Phusion dan Taq adalah stabil haba.
- Phusion dan Taq polimerase digunakan dalam mekanisme PCR untuk menguatkan DNA.
- Apabila menambahkan polimerase pada campuran tindak balas, kedua-dua polimerase Phusion dan Taq ditambah terakhir untuk memastikan kecekapan enzim.
- Kedua-dua polimerase Phusion dan Taq disintesis secara komersial untuk tujuan eksperimen biologi molekul.
- Kedua-dua polimerase Phusion dan Taq memerlukan kofaktor untuk melengkapkan fungsinya.
Apakah Perbezaan Antara Phusion dan Taq Polymerase?
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Phusion ialah polimerase DNA yang diasingkan daripada Pyrococcus furiosus dan digunakan terutamanya dalam eksperimen pengklonan untuk meningkatkan kesetiaan. | Taq DNA Polymerase ialah polimerase DNA standard yang digunakan dalam Polymerase Chain Reaction (PCR), dan ia diasingkan daripada bakteria termostabil, Thermus aquaticus. |
| Organisme Sumber | |
| Phusion diekstrak daripada archaea extremophilic – Pyrococcus furiosus. | Karya sastera ini bermula dari zaman penjajahan hingga zaman dekolonisasi. |
| Keupayaan membaca bukti | |
| 3’ – kebolehan membaca kalis 5’ terdapat dalam Phusion. | 3’ – keupayaan membaca kalis 5’ tiada dalam Taq polymerase. |
| Kesetiaan | |
| Kesetiaan tinggi ada dengan Phusion. | Taq polimerase menunjukkan kesetiaan yang rendah. |
| Penguatan | |
| Phusion mampu menguatkan serpihan DNA yang panjang. | Taq polymerase mampu menguatkan serpihan DNA yang lebih pendek. |
| dUTP Keracunan | |
| Tindakan phusion dihalang oleh pengumpulan ganjil. | Taq polymerase tidak dihalang oleh dUPT. |
Ringkasan – Phusion vs Taq polymerase
Phusion dan Taq DNA polymerase ialah dua polimerase stabil haba yang digunakan dalam teknik PCR. Phusion ialah polimerase yang diasingkan daripada extremophile, Pyrococcus furiosus manakala, Taq diasingkan daripada bakteria termostabil Thermus aquaticus. Penemuan polimerase DNA Taq membawa kepada ciptaan PCR. Phusion mempunyai banyak kelebihan berbanding Taq yang telah menjadikan Phusion pilihan yang lebih baik dalam menghasilkan DNA kesetiaan tinggi. Walau bagaimanapun, polimerase Taq masih digunakan sebagai enzim polimerase piawai dalam PCR. Ini ialah perbezaan antara Phusion dan Taq polymerase.
