Perbezaan utama antara Klenow dan T4 DNA polimerase ialah serpihan Klenow ialah serpihan besar E. coli DNA polimerase 1 manakala T4 DNA polimerase ialah DNA polimerase 1 daripada bakteriofaj T4.
DNA polimerase ialah enzim yang memangkinkan pembentukan DNA dengan menambahkan deoksiribonukleotida pada hujung 3′-OH primer yang sedia ada. Terdapat pelbagai jenis polimerase DNA. Kebanyakan polimerase DNA yang digunakan dalam biologi molekul ialah polimerase DNA prokariotik. Serpihan Klenow dan polimerase DNA T4 adalah dua jenis polimerase DNA yang mempunyai asal prokariotik. Serpihan Klenow ialah serpihan besar yang dihasilkan daripada belahan E.coli DNA polimerase 1 kepada dua serpihan oleh subtilisin protease bakteria. T4 DNA polymerase ialah DNA polimerase 1 dari bacteriophage T4. Kedua-dua Klenow dan T4 DNA polimerase mempunyai aktiviti 5′→3′ polimerase dan 3′→5′ exonuclease. Kedua-duanya tidak mempunyai aktiviti exonuclease 5′→3′, menjadikannya lebih sesuai untuk banyak aplikasi dalam biologi molekul.
Apa itu Klenow?
serpihan Klenow ialah polimerase DNA yang berguna dalam biologi molekul. Apabila E. coli DNA polimerase 1 mengalami pencernaan proteolitik oleh protease bakteria, subtilisin, ia menghasilkan dua serpihan: satu adalah serpihan besar, dan satu lagi adalah serpihan kecil. Serpihan Klenow ialah serpihan besar yang bersaiz 68 kDa. Serpihan Klenow mempunyai aktiviti 5′→3′ polimerase dan 3′→5′ exonuclease (pembacaan pruf) DNA Pol I. Aktiviti eksonuklease 3′→5′ serpihan Klenow memudahkan penyingkiran bes yang tidak ditambah dengan betul semasa pempolimeran berlangsung. Serpihan Klenow tidak mengandungi aktiviti exonuclease 5′→3′, yang ditunjukkan oleh E.coli DNA polimerase 1. Adalah berfaedah apabila hanya aktiviti pempolimeran diperlukan sahaja. Serpihan Klenow digunakan untuk mengisi overhang 5’, sintesis probe, penjujukan DNA, sintesis DNA untai dua, sintesis untai kedua cDNA dan mutagenesis terarah tapak.
Rajah 01: Serpihan Klenow
Dalam aplikasi tertentu, aktiviti exonuclease 3′→5′ serpihan Klenow juga menjadi tidak diingini. Ia boleh dikeluarkan dengan memperkenalkan mutasi kepada gen yang mengekod serpihan Klenow. Serpihan Klenow yang terhasil dikenali sebagai serpihan exo-Klenow. Oleh itu, serpihan exo-Klenow hanya mempunyai aktiviti polimerase 5′→3′ E. coli polimerase 1.
Apakah itu T4 DNA Polymerase?
T4 DNA polymerase ialah polimerase DNA yang memangkinkan sintesis DNA. Ia adalah protein yang dikodkan oleh Bacteriophage T4. Secara struktur, polimerase DNA T4 ialah protein sisa asid amino 898 (berat molekul 103.6 kDa). Ia memerlukan templat dan buku asas untuk memangkinkan sintesis.
Rajah 02: T4 DNA Polimerase
Serupa dengan serpihan Klenow, polimerase DNA T4 mempunyai kedua-dua aktiviti 5′→3′ polimerase dan 3′→5′ exonuclease. Selain itu, ia tidak mempunyai aktiviti exonuclease 5′→3′ juga. Polimerase DNA T4 berguna dalam pengisian hujung serpihan DNA yang menonjol 5'. Ia juga sering digunakan untuk pelabelan 5'-hujung atau 3'-akhir DNA untai dua. Polimerase DNA T4 kerap digunakan dalam pengklonan tumpul. Aktiviti 3′→5′ exonuclease (membaca pruf) polimerase DNA T4 adalah lebih kuat (lebih daripada 200 kali ganda) daripada serpihan Klenow. Paling penting, polimerase DNA T4 mempunyai proses yang tinggi (400 nukleotida sesaat).
Apakah Persamaan Antara Klenow dan T4 DNA Polymerase?
- Klenow dan T4 DNA polimerase ialah dua polimerase prokariotik.
- Kedua-dua polimerase mempunyai aktiviti 5′→3′ polimerase dan 3′→5′ exonuclease.
- Mereka tidak mempamerkan aktiviti exonuclease 5′→3′.
- Kedua-dua enzim memerlukan templat dan primer untuk memangkinkan sintesis DNA.
- Enzim ini boleh dinyahaktifkan haba pada 75 0
Apakah Perbezaan Antara Klenow dan T4 DNA Polymerase?
Perbezaan utama antara Klenow dan T4 DNA polymerase ialah asal usul setiap enzim. Serpihan Klenow berasal daripada bakteria manakala polimerase DNA T4 berasal daripada bakteriofaj iaitu virus. Polimerase DNA T4 mempunyai prosestiviti yang tinggi daripada serpihan Klenow. Selain itu, polimerase DNA T4 mempunyai aktiviti pembacaan pruf yang kuat daripada serpihan Klenow. Oleh itu, ini adalah satu lagi perbezaan antara Klenow dan polimerase DNA T4.
Grafik maklumat di bawah menyenaraikan lebih banyak perbezaan antara polimerase DNA Klenow dan T4 dalam bentuk jadual.
Ringkasan – Klenow lwn T4 DNA Polymerase
Serpihan Klenow ialah serpihan besar E. coli DNA polimerase 1. Ia hanya mempunyai aktiviti 5′→3′ polimerase dan 3′→5′ exonuclease. Ia tidak mempunyai aktiviti exonuclease 5′→3′ bagi E. coli DNA pol 1 yang utuh. Oleh itu, serpihan Klenow ialah polimerase bakteria. Sebaliknya, polimerase DNA T4 ialah polimerase yang dikodkan oleh bakteriofaj T4. Sama seperti serpihan Klenow, ia mengandungi kedua-dua 5′→3′ polimerase dan 3′→5′ aktiviti exonuclease, dan ia tidak mempunyai aktiviti exonuclease 5′→3′. Walau bagaimanapun, polimerase DNA T4 mempunyai proses yang tinggi dan aktiviti pembacaan pruf yang tinggi daripada serpihan Klenow. Jadi, inilah perbezaan utama antara Klenow dan polimerase DNA T4.
