Perbezaan Utama – Nitroselulosa lwn PVDF
Western blotting ialah kaedah yang membolehkan pengesanan dan kuantifikasi protein tertentu daripada sampel protein. Kebolehpercayaan teknik bergantung pada pemilihan membran yang betul untuk penyerapan protein daripada gel. Terdapat pelbagai jenis membran mikroporous. Membran nitroselulosa dan PVDF adalah dua membran yang disukai oleh penyelidik kerana sifat-sifat istimewanya berbanding jenis membran yang lain. Pemilihan antara nitroselulosa atau PVDF juga merupakan satu lagi cabaran dalam western blotting. Kedua-dua nitroselulosa dan PVDF mempunyai kapasiti penyerapan protein yang tinggi. Perbezaan utama antara membran nitroselulosa dan PVDF ialah membran nitroselulosa tidak mempunyai keupayaan untuk menanggalkan antibodi dan menggunakan semula membran untuk pemeriksaan semula antibodi manakala membran PVDF mempunyai keupayaan pelucutan dan penggunaan semula.
Apakah Nitrocellulose?
Nitrocellulose ialah polimer yang dihasilkan dengan merawat selulosa dengan asid nitrik dan digunakan untuk membuat membran mikroporous dalam biologi molekul, terutamanya untuk teknik blotting seperti southern, northern dan western blotting. Saiz liang membran nitroselulosa berkisar antara 3 hingga 20 µm. Membran mikroporous nitroselulosa memudahkan pengesanan tindak balas imunokimia yang berlaku pada permukaan membran. Oleh itu, membran nitroselulosa kerap digunakan untuk imobilisasi protein dan pengesanan protein tertentu dalam western blotting. Membran nitroselulosa juga boleh melumpuhkan glikoprotein dan asid nukleik.
Membran nitroselulosa lebih disukai dalam ujian aliran sisi kerana beberapa ciri. Membran nitroselulosa menyerap protein pada kepekatan yang tinggi. Pelarut yang digunakan untuk membasahkan membran tidak mengurangkan penyerapan protein membran nitroselulosa. Membran nitroselulosa boleh dipotong dengan mudah mengikut saiz gel yang dikehendaki dan memindahkan protein dari gel ke membran melalui pemindahan elektrik atau kapilari. Nitroselulosa membolehkan aliran protein yang lebih cepat melalui membran dengan potensi mengikat yang tinggi. Nitroselulosa menunjukkan kekuatan pengendalian yang lebih baik. Satu lagi sifat istimewa membran nitroselulosa ialah ia boleh dilekatkan dengan mudah dengan pelekat kalis air bukan pelarut pada pelbagai sandaran plastik.
Rajah 01: Membran nitroselulosa untuk western blotting
Apakah itu PVDF?
Polyvinylidene difluoride (PVDF) ialah fluoropolymer yang dihasilkan oleh pempolimeran vinylidene difluoride dan mempunyai keupayaan imobilisasi tinggi bagi protein. Oleh itu, membran mikroporous yang diperbuat daripada PVDF digunakan dalam teknik western blotting untuk menganalisis protein tertentu daripada campuran protein. Membran PVDF juga boleh digunakan untuk analisis asid amino dan penjujukan protein. Ciri terpenting membran PVDF berbanding membran nitroselulosa ialah ia boleh dengan mudah dilucutkan daripada antibodi dan digunakan semula untuk probe antibodi berikutnya.
Membran PVDF lebih tebal daripada membran nitroselulosa; oleh itu, lebih tahan terhadap kerosakan semasa digunakan semula. Membran PVDF sangat hidrofobik. Oleh itu, ia mesti direndam dalam metanol atau isopropanol sebelum digunakan.
Apakah perbezaan antara Nitrocellulose dan PVDF?
Nitrocellulose vs PVDF |
|
| Nitrocellulose ialah polimer yang terdiri daripada selulosa. | PVDF ialah fluoropolimer yang dihasilkan oleh pempolimeran vinylidene difluoride. |
| Saiz Liang Membran | |
| Saiz pori biasa ialah 0.1, 0.2 atau 0.45μ | Saiz pori biasa ialah 0.1, 0.2 atau 0.45μm |
| Kapasiti Mengikat Protein | |
| Nitrocellulose mempunyai kapasiti pengikatan protein 80 hingga 100 μg/cm2. | PVDF mempunyai kapasiti pengikatan protein 170 hingga 200 μg/cm2. |
| Sensitiviti | |
| Ini mempunyai sensitiviti yang rendah berbanding PVDF. | Ini mempunyai sensitiviti yang tinggi. |
| Pengesanan Protein Kurang Penyataan | |
| Memandangkan sensitiviti rendah dalam membran nitroselulosa, ia tidak sesuai untuk pengesanan protein rendah yang dinyatakan. | Ini lebih sesuai untuk pengesanan protein yang dinyatakan rendah kerana kepekaannya yang tinggi. |
| Bunyi Latar Belakang | |
| Ini mempunyai bunyi latar belakang yang lebih rendah | Ini mempunyai bunyi latar belakang yang lebih tinggi. |
| Interaksi dengan Protein | |
| Molekul protein mengikat membran nitroselulosa melalui interaksi hidrofobik. | Protein mengikat pada membran PVDF melalui interaksi hidrofobik dan dipol. |
| Sifat Membran | |
| Nitrocellulose adalah rapuh dan rapuh. Walau bagaimanapun, versi nitroselulosa tersedia dan ia tahan. | PVDF lebih tahan lama dan mempunyai rintangan kimia yang lebih tinggi. |
| Keupayaan untuk Menanggalkan dan Menggunakan Semula | |
| Nitroselulosa mungkin mengalami kesukaran untuk menanggalkan dan menegur tanpa kehilangan isyarat. | PVDF sangat sesuai untuk penyiasatan semula dan penjujukan aplikasi. |
| Kesesuaian | |
| Nitrocellulose sesuai untuk mengesan protein berat molekul rendah. | PVDF lebih sesuai untuk mengesan protein berat molekul yang lebih tinggi. |
| Kegunaan Lain | |
| Nitrocellulose boleh digunakan untuk analisis asid nukleik dan blotting titik/slot. | PVDF boleh digunakan untuk penjujukan protein dan sistem ujian fasa pepejal. |
| Kos | |
| Ini lebih murah daripada membran PVDF. | Ini lebih mahal daripada membran nitroselulosa. |
| Perlu untuk Pra-pembasahan | |
| Membran nitroselulosa tidak memerlukan prarendam dengan metanol | Membran PVDF memerlukan prarendam dengan metanol. |
Ringkasan – Nitroselulosa lwn PVDF
Membran nitroselulosa ialah membran pertama yang digunakan secara komersial untuk ujian aliran sisi. Mereka mempunyai kapasiti yang tinggi untuk menyerap protein. Oleh itu, membran nitroselulosa digunakan dalam western blotting. PVDF ialah satu lagi jenis membran yang digunakan dalam western blotting dan ia juga mempunyai kapasiti penyerapan protein yang tinggi. Kedua-dua jenis digunakan dalam western blotting untuk analisis protein. Walau bagaimanapun, membran PVDF mempunyai lebih banyak sifat istimewa, menjadikannya lebih sesuai daripada membran nitroselulosa untuk pembongkaran barat. Tetapi, membran nitroselulosa lebih sesuai untuk mengesan protein berwajaran molekul rendah, membran PVDF lebih sesuai untuk mengesan protein berwajaran molekul tinggi. Ini ialah perbezaan antara membran nitroselulosa dan PVDF.
