Perbezaan Utama – Nitroselulosa lwn Membran Nilon
Blotting ialah teknik penting untuk mengesan urutan spesifik DNA, RNA dan protein daripada campurannya dalam biologi molekul. Ia dilakukan menggunakan membran yang dipanggil blot. Terdapat teknik blotting yang berbeza seperti northern, southern dan western blotting. Memilih membran yang sesuai untuk proses blotting harus dilakukan dengan teliti untuk mengelakkan pengikatan tidak spesifik dan pengesanan yang salah. Nitroselulosa, nilon, dan PVDF adalah membran yang biasa digunakan dalam teknik blotting. Mereka mempunyai ciri-ciri yang berbeza. Perbezaan utama antara membran nitroselulosa dan nilon ialah membran nitroselulosa mempunyai potensi imobilisasi protein yang tinggi manakala membran nilon mempunyai potensi imobilisasi asid nukleik yang tinggi. Walau bagaimanapun, kedua-dua jenis membran kerap digunakan dalam teknik blotting.
Apakah Membran Nitroselulosa?
Membran Nitrocellulose ialah penapis membran yang biasa digunakan dalam asid nukleik dan teknik blotting protein. Ia mempunyai potensi mengikat protein yang tinggi. Oleh itu, membran nitroselulosa digunakan secara meluas dalam teknik western blotting. Membran nitroselulosa serasi dengan semua teknik hibridisasi dan menunjukkan kapasiti pengikatan yang unggul tanpa gangguan. Membran nitroselulosa secara semula jadi bersifat hidrofilik. Mereka membuat interaksi hidrofilik dengan molekul dan dengan cekap melumpuhkannya ke membran. Membran nitroselulosa komersial boleh didapati dalam dua saiz liang: 0.45 dan 0.2 µm.
Rajah 01: Membran nitroselulosa yang digunakan dalam western blotting
Apakah Membran Nilon?
Membran nilon ialah satu lagi jenis membran komersial yang digunakan dalam teknik blotting. Ia digunakan secara alternatif dengan membran nitroselulosa untuk penghapusan selatan dan utara. Membran nilon adalah sesuai untuk pembongkaran selatan daripada nitroselulosa kerana pertalian tinggi mereka untuk mengikat dengan DNA. Disebabkan oleh beberapa ciri unik membran nilon, penyelidik biasanya menggunakan membran nilon untuk pembersihan selatan dan utara dan bukannya lebih membran nitroselulosa. Membran nilon juga disyorkan untuk menanggalkan dan meresap, tidak seperti nitroselulosa.
Rajah 02: Membran nilon yang digunakan untuk blotting selatan
Apakah perbezaan antara Nitroselulosa dan Membran Nilon?
Nitroselulosa lwn Membran Nilon |
|
| Membran nitroselulosa rapuh. | Membran nilon kurang rapuh. |
| Pengendalian | |
| Ia sukar dikendalikan. | Ia mudah dikendalikan. |
| Menyalah semula | |
| Membran nitroselulosa yang tidak disokong sukar untuk disiasat semula. | Menyerap adalah mudah dengan membran nilon. |
| Keserasian dengan Pelbagai Keadaan Storan | |
| Membran nitroselulosa mempunyai kekuatan yang kurang untuk menahan pelbagai keadaan penyimpanan. | Membran nilon bertindak balas dengan lebih teguh kepada pelbagai keadaan penyimpanan. |
| Gunakan | |
| Prewetting diperlukan. | Prewetting tidak diperlukan untuk membran nilon. |
| Sifat Hidrofilik | |
| Membran nitroselulosa bersifat hidrofilik tetapi kurang hidrofilik daripada membran nilon. | Ia sangat hidrofilik. |
| Potensi Imobilisasi | |
| Membran nitroselulosa mempunyai kurang pertalian untuk asid nukleik. Tetapi ia mempunyai pertalian tinggi untuk protein. | Membran nilon mempunyai potensi pengikatan yang tinggi dengan asid nukleik berbanding membran nitroselulosa. |
Ringkasan – Nitroselulosa lwn Membran Nilon
Nitroselulosa dan membran nilon ialah kepingan khas yang digunakan dalam teknik blotting untuk menghasilkan semula corak jalur pada gel. Mereka membolehkan kemungkinan mengesan urutan tertentu atau protein daripada campuran dengan melumpuhkannya pada membran. Setelah molekul tidak bergerak pada membran, ia boleh digunakan sebagai substrat untuk analisis hibridisasi dengan probe berlabel. Membran nitroselulosa biasanya digunakan untuk pengesanan protein dalam teknik western blotting kerana pertalian mengikatnya yang tinggi dengan protein. Membran nilon sering digunakan untuk blotting selatan dan utara. Ini ialah perbezaan antara nitroselulosa dan membran nilon.
