Perbezaan utama antara pewarnaan Coomassie dan perak ialah pewarnaan coomassie ialah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan biru cemerlang coomassie, manakala pewarnaan sekerat ialah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan perak.
Pemisahan dan pengenalpastian protein merupakan langkah kritikal dalam analisis protein. Mereka memerlukan pencirian protein resolusi tinggi selepas elektroforesis gel. Terdapat banyak teknik pewarnaan yang merangkumi pewarnaan berbeza seperti pewarna anionik (biru cemerlang coomassie), kation logam (imidazole-zink), pewarna perak dan pewarna pendarfluor, dll. Kadangkala, probe radioaktif juga boleh digunakan. Pilihan teknik pewarnaan bergantung pada kesederhanaan, ketersediaan peralatan pengimejan di makmal, dsb.
Apakah itu Coomassie Staining?
Pewarnaan Coomassie ialah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan biru cemerlang coomassie. Ia biasanya dipanggil teknik biru coomassie. Coomassie brilliant blue ialah pewarna protein anionik yang paling popular. Noda ini biasanya mengotorkan hampir semua protein dengan lineariti kuantitatif yang baik pada sensitiviti sederhana. Noda biru cemerlang Coomassie mengikat secara tidak khusus kepada hampir semua protein. Terdapat dua varian coomassie brilliant blue stain berbeza: R-250 dan G-250. R-250 menawarkan masa pewarnaan yang lebih singkat, manakala G-250 tersedia dalam formulasi yang lebih sensitif dan mesra alam.
Rajah 01: Pewarnaan Coomassie
Pewarna Coomassie sangat popular dalam kajian spektrometri jisim dan kajian pengenalan protein. Selain itu, pewarna coomassie bio-safe ialah formulasi tidak berbahaya bagi coomassie blue G-250 yang kini boleh didapati di pasaran. Kelebihan formulasi ini ialah ia hanya memerlukan air untuk membilas dan mencairkan. Noda coomassie bio-selamat menawarkan kepekaan yang setara dengan coomassie blue G-250 konvensional tetapi lebih baik daripada coomassie stain R-250. Tambahan pula, ia mempunyai protokol pewarnaan yang lebih mudah dan cepat daripada G-250 biru Coomassie konvensional. Kelemahan pewarnaan biru coomassie ialah ia kurang sensitif berbanding pewarnaan perak. Pewarnaan biru Coomassie adalah kira-kira 50 kali ganda kurang sensitif daripada pewarnaan perak. Walau bagaimanapun, disebabkan kesederhanaan dalam mengikat, ia lebih disukai dalam banyak kajian.
Apakah Pewarnaan Perak?
Pewarnaan perak ialah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan perak. Pewarnaan perak digunakan untuk mengotorkan kedua-dua gel agarose dan poliakrilamida. Pewarnaan perak protein dalam gel agarose pertama kali dibangunkan pada tahun 1973 oleh Kerenyi dan Gallyas. Kemudian, ia telah disesuaikan untuk protein dalam gel poliakrilamida yang digunakan dalam SDS-PAGE. Pada masa ini, pewarnaan perak juga digunakan untuk pewarnaan DNA atau RNA. Untuk mengotorkan gel, gel diinkubasi dengan larutan perak nitrat dalam kaedah ini. Pewarnaan perak mengotorkan tapak yang terdapat protein daripada coklat kepada hitam.
Rajah 02: Pewarnaan Perak
Keamatan pewarnaan perak bergantung pada struktur utama protein. Selain itu, kebersihan bekas yang digunakan dan ketulenan reagen juga boleh mempengaruhi kualiti pewarnaan perak. Walau bagaimanapun, kelemahan pewarnaan perak ialah ia tidak dapat mengesan semua protein, terutamanya glikoprotein dan protein dengan kumpulan besar yang diubah suai yang melekat pada rantai sisinya.
Apakah Persamaan Antara Coomassie dan Pewarnaan Perak?
- Coomassie dan pewarnaan perak ialah dua teknik yang digunakan dalam pewarnaan protein.
- Ia boleh mengotorkan kedua-dua protein dan DNA.
- Kedua-dua teknik pewarnaan mempunyai kelemahan.
- Teknik ini mempunyai langkah yang serupa, seperti membetulkan, mengotorkan dan menapis.
Apakah Perbezaan Antara Coomassie dan Pewarnaan Perak?
Pewarnaan Coomassie ialah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan biru cemerlang coomassie, manakala pewarnaan sekerat ialah teknik pewarnaan protein yang menggunakan pewarnaan perak. Oleh itu, ini adalah perbezaan utama antara Coomassie dan pewarnaan perak. Tambahan pula, pewarnaan Coomassie kurang sensitif daripada pewarnaan perak.
Maklumat di bawah menyenaraikan perbezaan antara pewarnaan Coomassie dan perak dalam bentuk jadual untuk perbandingan sebelah menyebelah.
Ringkasan – Coomassie lwn Silver Staining
Untuk menggambarkan protein, tindak balas kimia pengikat pewarna atau warna khusus protein boleh dilakukan. Ini dipanggil pewarnaan protein. Pewarnaan Coomassie dan perak adalah dua teknik yang digunakan dalam pewarnaan protein. Teknik pewarnaan Coomassie menggunakan pewarnaan biru cemerlang coomassie manakala pewarnaan sekerat menggunakan pewarnaan perak. Jadi, inilah perbezaan utama antara pewarnaan Coomassie dan perak.
