Perbezaan Utama – Stain Gram vs Budaya
Pewarnaan gram ialah teknik pewarnaan yang dilakukan untuk membezakan bakteria kepada dua kumpulan mengikut ketebalan lapisan peptidoglikan dalam dinding selnya. Kultur ialah kaedah membesar dan mengekalkan mikroorganisma di bawah keadaan makmal untuk analisis yang berbeza. Perbezaan utama antara pewarnaan gram dan kultur ialah fungsinya; terikan gram teknik pewarnaan bakteria dengan kultur ialah kaedah membesar dan mengekalkan mikroorganisma.
Apakah itu Gram Stain?
Pewarnaan gram ialah teknik pewarnaan pembezaan penting yang digunakan untuk pengecaman bakteria dalam Mikrobiologi. Teknik ini telah diperkenalkan oleh Pakar Bakteri Denmark Hans Christian Gram pada tahun 1884. Pewarnaan Gram mengkategorikan bakteria kepada dua kumpulan utama: gram positif dan gram negatif; ini sangat penting dalam pengelasan dan pengenalpastian bakteria. Pewarnaan gram dilakukan sebagai langkah awal untuk pencirian bakteria.
Bakteria dikumpulkan berdasarkan perbezaan dalam dinding selnya. Bakteria Gram positif mengandungi lapisan peptidoglycan yang tebal dalam dinding selnya manakala bakteria Gram negatif mengandungi lapisan peptidoglycan nipis dalam dinding selnya seperti yang ditunjukkan dalam rajah 01. Hasil pewarnaan gram akan berdasarkan perbezaan ketebalan dalam lapisan peptidoglycan bagi dinding sel.
Rajah 1: Bakteria Gram positif dan bakteria Gram negatif
Pewarnaan Gram dilakukan menggunakan empat reagen berbeza iaitu; pewarna primer, mordan, agen penyahwarna dan pewarna balas. Crystal violet dan safranin masing-masing berfungsi sebagai pewarna primer dan counter, manakala gram iodin dan 95% alkohol masing-masing berfungsi sebagai mordan dan penyahwarna.
Langkah Asas Pewarnaan Gram
- Sapuan bakteria disediakan pada slaid kaca bersih, haba tetap dan disejukkan.
- Calitan dibanjiri dengan kristal violet selama 1 – 2 minit.
- Sapuan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan untuk menghilangkan kotoran yang berlebihan.
- Gram iodin disapu pada sapuan selama 1 minit.
- Sapuan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan
- Sapuan dicuci dengan alkohol 95% selama 2 – 5 saat dan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan.
- Sapuan diwarnakan balas dengan safranin selama 1 minit
- Calitan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan, dikeringkan dan diperhatikan di bawah mikroskop.
Di penghujung pewarnaan gram, bakteria gram negatif akan diperhatikan dalam warna merah jambu manakala bakteria gram positif akan diperhatikan dalam warna ungu seperti yang ditunjukkan dalam Rajah 02. Hasil pewarnaan gram ditentukan oleh ketebalan lapisan peptidoglikan dalam dinding selnya. Semasa langkah penyahwarnaan, pewarna primer dan mordan mudah dikeluarkan daripada bakteria gram negatif dan menjadi tidak berwarna kerana ia mempunyai lapisan peptidoglikan yang nipis. Noda primer dikekalkan dalam bakteria gram positif kerana ia mempunyai lapisan peptidoglikan yang tebal. Noda balas tidak akan berkesan untuk bakteria gram positif kerana pengekalan noda utama. Jadi bakteria gram positif akan kelihatan dalam warna noda primer, iaitu, warna ungu. Pewarnaan balas akan mengotorkan bakteria gram negatif dan akan kelihatan dalam warna pilihan iaitu warna safranin. Oleh itu, adalah mudah untuk mengkategorikan bakteria kepada dua kumpulan dengan pewarnaan gram dan ia bernilai dalam pembezaan dan pengenalpastian bakteria.
Rajah 2: Terikan Gram
Apakah itu Budaya?
Budaya mikrob ialah kaedah membiak dan mengekalkan mikroorganisma di bawah keadaan makmal untuk tujuan yang berbeza. Kultur ditanam dalam media pepejal, separa pepejal dan cecair berdasarkan jenis dan tujuan pengkulturan mikroorganisma. Kultur dibekalkan dengan nutrien yang diperlukan dan keadaan pertumbuhan yang diperlukan oleh mikroorganisma. Terdapat pelbagai komponen medium kultur seperti sumber tenaga, sumber karbon, sumber nitrogen, mineral, mikronutrien, air, agen pemejalan, dsb. Suhu optimum, oksigen dan pH perlu diselaraskan mengikut jenis mikroorganisma yang ditanam.
Terdapat pelbagai jenis kultur mikrob; contohnya kultur batch, kultur berterusan, kultur tikam, kultur plat agar, kultur sup, dll. Mengikut komposisi media tanam, terdapat pelbagai jenis media kultur yang dikenali sebagai media sintetik, media separa sintetik dan media semula jadi. Kultur mikrob disediakan dalam keadaan steril di dalam ruang khas yang dipanggil aliran udara lamina. Media tumbuh dan barangan kaca disterilkan sebelum inokulasi mikroorganisma yang dikehendaki. Di bawah keadaan steril yang betul, mikroorganisma sasaran dipindahkan ke dalam medium nutrien yang disterilkan dan diinkubasi pada suhu optimum. Di dalam medium, mikroorganisma akan membesar dan membiak menggunakan nutrien yang disediakan.
Rajah 3: Kultur bakteria pada pinggan
Apakah perbezaan antara Gram Stain dan Culture?
Gram Stain vs Culture |
|
| Terikan Gram ialah teknik pewarnaan pembezaan yang digunakan untuk pembezaan dan pengecaman bakteria. | Budaya mikrob ialah kaedah pembiakan mikroorganisma di makmal. |
| Komponen | |
| Ini menggunakan reagen berbeza termasuk dua stain. | Ini menggunakan media kultur yang berbeza seperti media pepejal, separa pepejal dan cecair yang terdiri daripada nutrien dan keadaan lain yang diperlukan. |
| Fungsi Asas | |
| Ini membolehkan pengelompokan bakteria kepada dua kumpulan: gram negatif dan gram positif. | Ini membenarkan pendaraban mikroorganisma untuk tujuan yang berbeza. |
| Asas | |
| Hasil pewarnaan gram adalah berdasarkan perbezaan dalam lapisan peptidoglikan dinding sel. | Mikroorganisma akan tumbuh dan membiak di dalam media kultur. |
| Hasil | |
| Bakteria gram negatif kelihatan dalam warna merah jambu dan bakteria gram positif kelihatan dalam warna ungu. | Di atas pinggan, koloni mikroorganisma boleh dilihat. Pada media cecair, mikroorganisma berada dalam bentuk terampai. |
Ringkasan – Gram Stain vs Culture
Kultur mikrob disediakan dan diselenggara di bawah keadaan makmal untuk tujuan berbeza seperti penyimpanan, ujian, penulenan kimia, dll. Pewarnaan gram ialah prosedur pewarnaan yang membezakan bakteria kepada dua kumpulan utama yang dipanggil bakteria gram negatif dan bakteria gram positif. Oleh itu, perbezaan antara pewarnaan gram dan kultur ialah pewarnaan gram ialah teknik pewarnaan bakteria manakala kultur ialah kaedah untuk membesar dan mengekalkan mikroorganisma di makmal.
