Perbezaan Utama – Pewarnaan Gram vs Cepat Asid
Bakteria ialah mikroorganisma yang sangat kecil. Mereka telus, dan pengesanan mereka sukar dalam keadaan hidup dan tidak tercemar. Oleh itu, pelbagai kaedah pewarnaan dibangunkan untuk memudahkan pengesanan bakteria. Terdapat tiga jenis utama teknik pewarnaan: pewarnaan mudah, pewarnaan pembezaan, dan pewarnaan struktur. Pewarnaan pembezaan ialah teknik yang menggunakan lebih daripada satu pewarnaan untuk membezakan bakteria. Pewarnaan gram dan pewarnaan tahan asid paling popular dikenali sebagai pewarnaan pembezaan. Pewarnaan Gram ialah teknik pewarnaan pembezaan, yang memisahkan bakteria kepada dua kumpulan yang dikenali sebagai bakteria Gram-positif dan bakteria Gram-negatif. Pewarna tahan asid ialah pewarnaan pembezaan yang digunakan untuk mengenal pasti organisma tahan asid seperti Mycobacterium daripada organisma tidak cepat asid. Ini ialah perbezaan utama antara pewarnaan Gram dan pewarnaan Acid Fast.
Apakah itu Gram Stain?
Pewarnaan gram ialah teknik pewarnaan pembezaan penting yang digunakan untuk pengecaman bakteria dalam mikrobiologi. Teknik ini telah diperkenalkan oleh Pakar Bakteri Denmark Hans Christian Gram pada tahun 1884. Pewarnaan Gram mengkategorikan bakteria kepada dua kumpulan besar yang dinamakan gram positif dan gram negatif, yang sangat penting dalam pengelasan dan pengenalpastian bakteria. Ahli mikrobiologi melakukan pewarnaan gram sebagai langkah awal dalam pencirian bakteria semasa pengajian mereka.
Bakteria dikumpulkan berdasarkan perbezaan dalam dinding selnya. Bakteria Gram positif terdiri daripada lapisan peptidoglycan tebal dalam dinding sel mereka manakala bakteria gram negatif terdiri daripada lapisan peptidoglycan nipis dalam dinding sel mereka. Hasil pewarnaan gram akan berdasarkan perbezaan ketebalan lapisan peptidoglikan dinding sel.
Pewarnaan Gram dilakukan menggunakan empat reagen berbeza iaitu; pewarna primer, mordan, agen penyahwarna dan pewarna balas. Crystal violet dan safranin digunakan sebagai pewarna primer dan counter, manakala gram iodin dan 95% alkohol masing-masing digunakan sebagai mordan dan penyahwarna. Langkah asas pewarnaan gram adalah seperti berikut;
- Sapuan bakteria disediakan pada slaid kaca bersih, haba tetap dan disejukkan.
- Calitan dibanjiri dengan kristal violet selama 1 – 2 minit.
- Sapuan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan untuk menghilangkan kotoran yang berlebihan.
- Gram iodin disapu pada sapuan selama 1 minit.
- Sapuan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan
- Sapuan dicuci dengan alkohol 95% selama 2 – 5 saat dan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan.
- Sapuan diwarnakan balas dengan safranin selama 1 minit
- Calitan dibilas dengan air paip yang mengalir perlahan, dikeringkan dan diperhatikan di bawah mikroskop.
Di penghujung pewarnaan gram, bakteria gram negatif akan diperhatikan dalam warna merah jambu manakala bakteria gram positif akan diperhatikan dalam warna ungu.
Rajah 01: Bakteria Gram negatif dan Gram positif
Hasil pewarnaan gram ditentukan oleh ketebalan lapisan peptidoglikan dalam dinding selnya. Semasa langkah penyahwarnaan, pewarna primer dan mordan mudah dikeluarkan daripada bakteria gram negatif dan menjadi tidak berwarna kerana ia mempunyai lapisan peptidoglikan yang nipis. Noda primer dikekalkan dalam bakteria gram positif kerana ia mempunyai lapisan peptidoglycan yang tebal. Noda balas tidak akan berkesan untuk bakteria gram positif kerana pengekalan noda primer. Oleh itu, bakteria gram positif akan kelihatan dalam warna noda primer, iaitu, warna ungu. Noda balas akan mengotorkan bakteria gram negatif, dan ia akan kelihatan dalam warna pilihan, iaitu warna safranin. Oleh itu, adalah mudah untuk mengkategorikan bakteria kepada dua kumpulan mengikut pewarnaan gram dan ia bernilai dalam pembezaan dan pengenalpastian bakteria.
Apakah itu Cepat Asid?
Ketahanan asid ialah sifat fizikal bakteria tertentu, khususnya ketahanannya terhadap penyahwarnaan oleh asid semasa prosedur pewarnaan. Setelah diwarnakan, organisma ini menentang prosedur penyahwarnaan berasaskan asid cair dan atau etanol yang biasa dalam kebanyakan protokol pewarnaan. Oleh itu, nama 'cepat asid' diberikan kepada organisma tersebut. Sifat ini ditunjukkan kerana mempunyai tahap bahan berlilin (asid mikolik) yang tinggi dalam dinding selnya. Ujian ini penting untuk mengenal pasti Mycobacterium tuberculosis.
Rajah 2: Mikobakteria Cepat Asid
Calitan tahan asid ini telah dibangunkan oleh Paul Ehrlich pada tahun 1882. Teknik cepat asid Ehrlich telah diubah suai oleh Ziehl-Neelsen dan ia kini digunakan dengan lebih kerap. Prosedur pewarnaan cepat asid melibatkan tiga reagen berbeza. Carbol fuschin digunakan sebagai pewarna utama. Alkohol asid digunakan sebagai agen penyahwarna. Methylene Blue digunakan sebagai pewarna kaunter. Prosedur pewarnaan dilakukan seperti berikut.
- Koda primer (karbol fuchsin) digunakan pada spesimen tetap pada slaid (Semua sel akan diwarnakan dalam warna merah).
- Slaid dipanaskan dengan mengukus selama 5 minit, yang mendorong kotoran ke dalam sel dengan betul.
- Kemudian larutan penyahwarna ditambah (Ini menghilangkan pewarna merah daripada semua sel kecuali bakteria tahan asid).
- Metilena biru ditambah sebagai pewarna balas (Ia mewarnai semua sel bakteria yang dinyahwarna).
- Bakteria tahan asid kekal merah manakala bakteria tahan asid tidak berwarna biru.
Apakah Persamaan Antara Pewarnaan Gram dan Cepat Asid?
- Pewarna Gram dan Cepat Asid ialah dua teknik pewarnaan yang berbeza.
- Kedua-dua teknik mengkategorikan bakteria kepada dua kumpulan.
- Kedua-dua teknik menggunakan dua pewarnaan dan satu penyahwarna.
Apakah Perbezaan Antara Pewarnaan Gram dan Cepat Asid?
Warna Gram lwn Cepat Asid |
|
| Pewarnaan gram ialah teknik pewarnaan pembezaan, yang memisahkan bakteria kepada dua kumpulan bakteria Gram-positif dan bakteria Gram-negatif. | Noda Acid Fast ialah pewarnaan pembezaan yang digunakan untuk mengenal pasti organisma tahan asid daripada organisma bukan cepat asid. |
| Noda Utama | |
| Crystal violet ialah pewarna utama yang biasa digunakan dalam pewarnaan gram. | Carbol fuchsin ialah pewarna utama yang digunakan dalam cepat asid. |
| Agen Penyahwarna | |
| 95% alkohol digunakan sebagai agen penyahwarna dalam pewarnaan gram. | Alkohol asid digunakan sebagai agen penyahwarna dalam cepat asid. |
| Counter Stain | |
| Calitan gram menggunakan safranin sebagai pewarna balas. | Calitan tahan asid menggunakan biru metilena sebagai pewarna balas. |
| Pemerhatian | |
| Bakteria gram negatif diperhatikan dalam warna pilihan dan bakteria gram positif diperhatikan dalam warna ungu. | Bakteria Cepat Asid diperhatikan dalam warna merah dan bakteria bukan tahan asid diperhatikan dalam warna biru. |
Ringkasan – Pewarnaan Gram lwn Cepat Asid
Visualisasi mikroorganisma dalam keadaan hidup adalah sukar. Oleh itu, pewarnaan biologi dan prosedur pewarnaan digunakan secara meluas untuk mengkaji sifatnya. Pewarnaan pembezaan adalah salah satu jenis teknik pewarnaan yang digunakan untuk membezakan bakteria. Pewarnaan gram dan pewarnaan cepat asid adalah dua teknik pewarnaan berbeza. Pewarnaan Gram membezakan bakteria gram negatif dan bakteria gram positif berdasarkan ketebalan dinding selnya. Pewarnaan cepat asid membezakan bakteria cepat asid daripada bakteria bukan cepat asid berdasarkan kandungan asid mikolik dalam dinding sel. Ini ialah perbezaan antara tahan asid dan pewarnaan gram.
Muat turun Versi PDF Stain Gram vs Acid Fast
Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti dalam nota petikan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan Antara Stain Gram dan Cepat Asid.
