Perbezaan utama antara ujian PCR bersarang konvensional dan masa nyata ialah PCR konvensional ialah teknik yang dibangunkan untuk menguatkan jujukan DNA tertentu dan PCR bersarang ialah pengubahsuaian PCR konvensional yang terdiri daripada dua tindak balas penguatan berjujukan, manakala nyata -time PCR ialah varian PCR konvensional yang mampu mengukur produk yang dikuatkan.
PCR ialah teknik saintifik yang sangat biasa digunakan secara meluas dalam penyelidikan dan perubatan untuk mengesan DNA. Ujian PCR digunakan untuk mengesan antigen dengan mengesan DNA atau RNA mereka. Secara amnya, RNA virus terdapat dalam badan sebelum mengesan antibodi atau memaparkan simptom penyakit. Ujian PCR boleh mengetahui sama ada seseorang menghidap virus pada awal atau tidak. Pada masa ini, PCR ialah ujian standard untuk mengesan penyakit COVID-19. Terdapat pelbagai jenis teknik PCR seperti PCR masa nyata, PCR bersarang, PCR multipleks, PCR permulaan panas dan PCR jarak jauh, dsb.
Apakah itu Ujian PCR Konvensional?
Ujian PCR konvensional ialah teknik amplifikasi DNA in vitro yang dilakukan secara rutin di makmal biologi molekul. Kaedah ini membolehkan pengeluaran beribu hingga jutaan salinan serpihan DNA tertentu. Kary Mullis memperkenalkan teknik ini pada tahun 1980. Teknik ini memerlukan serpihan DNA yang dikenali sebagai templat untuk membuat banyak salinannya. Taq polymerase berfungsi sebagai enzim DNA polimerase dan memangkinkan sintesis helai baharu jujukan templat.
Primer dalam campuran PCR akan berfungsi sebagai titik permulaan untuk sambungan serpihan. Semua bahan yang diperlukan untuk membuat salinan DNA dimasukkan ke dalam campuran PCR. Tindak balas PCR dijalankan dalam mesin PCR, dan ia harus disuap dengan campuran PCR yang betul dan program PCR yang betul. Jika campuran tindak balas dan atur cara adalah betul, ia akan menghasilkan bilangan salinan bahagian tertentu DNA yang diperlukan daripada jumlah DNA yang sangat kecil.
Rajah 01: Ujian PCR Konvensional
Terdapat tiga langkah utama yang terlibat dalam tindak balas PCR: denaturasi, penyepuhlindapan primer dan sambungan helai. Tiga langkah ini berlaku pada tiga suhu berbeza. Penampan PCR mengekalkan keadaan optimum untuk tindakan polimerase Taq. Ketiga-tiga peringkat tindak balas PCR ini diulang untuk menghasilkan jumlah produk PCR yang diperlukan. Pada setiap tindak balas PCR, bilangan salinan DNA berganda. Oleh itu, penguatan eksponen boleh diperhatikan dalam PCR. Produk PCR boleh diselesaikan menggunakan elektroforesis gel kerana ia menghasilkan jumlah DNA yang boleh dilihat pada gel, dan ia boleh ditulenkan untuk kajian lanjut seperti penjujukan.
PCR ialah alat yang berharga dalam penyelidikan perubatan dan biologi. Terutamanya dalam kajian forensik, PCR mempunyai nilai yang sangat besar kerana ia boleh menguatkan DNA untuk kajian daripada sampel kecil penjenayah dan membuat profil DNA forensik. PCR digunakan secara meluas dalam banyak bidang biologi molekul termasuk, genotaip, pengklonan gen, pengesanan mutasi, penjujukan DNA, susunan mikro DNA dan ujian paterniti.
Apakah itu Nested PCR Assays?
PCR Bersarang ialah sejenis PCR yang mengurangkan penguatan bukan spesifik DNA. Terdapat dua PCR berturut-turut atau dua tindak balas penguatan berurutan dalam ujian PCR bersarang. Semasa tindak balas penguatan pertama, produk PCR dihasilkan. Selepas tindak balas pertama, tindak balas penguatan kedua dilakukan pada produk PCR tindak balas pertama. Oleh itu, primer dalam campuran tindak balas kedua mengikat dengan produk PCR pertama dan menguatkannya.
Rajah 02: PCR Bersarang
Pasangan primer adalah berbeza dalam setiap tindak balas. Pengikatan primer yang tidak spesifik dikurangkan dalam PCR bersarang. Ujian PCR bersarang berguna untuk meningkatkan sensitiviti dan/atau kekhususan. Walau bagaimanapun, PCR bersarang memerlukan pengetahuan tentang jujukan yang berminat.
Apakah itu Ujian PCR Masa Nyata?
PCR masa nyata atau PCR kuantitatif (Q PCR) ialah versi PCR yang diubah suai yang mengukur produk PCR secara kuantitatif. Oleh itu, teknik ini mengukur penguatan dalam masa nyata menggunakan mesin PCR masa nyata. Ia juga merupakan kaedah yang sesuai untuk menentukan jumlah urutan sasaran atau gen yang terdapat dalam sampel.
Ciri menarik PCR masa nyata ialah ia menggabungkan kedua-dua amplifikasi dan kuantifikasi sebenar ke dalam satu langkah. Oleh itu, keperluan untuk elektroforesis gel untuk pengesanan boleh dihapuskan dengan teknik PCR masa nyata. Penggunaan pewarna pendarfluor untuk melabel produk PCR semasa tindak balas PCR akhirnya akan membawa kepada kuantiti langsung. Apabila produk PCR terkumpul, isyarat pendarfluor juga terkumpul, dan ia akan diukur oleh mesin masa nyata. SYBR Green dan Taqman adalah dua kaedah untuk mengesan atau menonton proses penguatan PCR masa nyata. Kedua-dua kaedah memantau kemajuan proses penguatan dan melaporkan kuantiti produk dalam masa nyata.
Rajah 03: PCR Masa Nyata
PCR masa nyata mempunyai pelbagai jenis aplikasi seperti kuantifikasi ekspresi gen, mikroRNA dan analisis RNA bukan pengekodan, genotaip SNP, pengesanan varian nombor salinan, pengesanan mutasi yang jarang berlaku, pengesanan organisma yang diubah suai secara genetik, dan pengesanan agen berjangkit.
Apakah Persamaan Antara Ujian PCR Nested Konvensional dan Masa Nyata?
- Ujian PCR bersarang dan masa nyata ialah pengubahsuaian ujian PCR konvensional.
- Ketiga-tiga teknik menguatkan sampel DNA.
- Produk mereka boleh digunakan dalam penjujukan atau analisis.
- Ujian ini memerlukan primer.
Apakah Perbezaan Antara Ujian PCR Nested Konvensional dan Masa Nyata?
PCR konvensional ialah teknik yang dibangunkan untuk menguatkan jujukan DNA tertentu. Sementara itu, Nested PCR ialah pengubahsuaian PCR konvensional yang terdiri daripada dua tindak balas penguatan berjujukan, dan PCR masa nyata ialah varian PCR konvensional yang mampu mengukur produk yang dikuatkan. Jadi, ini adalah perbezaan utama antara ujian PCR bersarang konvensional dan masa nyata. Tidak seperti PCR konvensional dan masa nyata, PCR bersarang menggunakan dua set primer. Selain itu, terdapat dua tindak balas penguatan berturut-turut dalam PCR bersarang untuk mengurangkan penguatan tidak spesifik. selain itu, ujian PCR konvensional dan masa nyata tidak mengandungi dua tindak balas penguatan berurutan.
Maklumat berikut menyenaraikan perbezaan antara ujian PCR bersarang konvensional dan masa nyata dalam bentuk jadual untuk perbandingan sebelah menyebelah.
Ringkasan – Konvensional lwn Nested lwn Ujian PCR Masa Nyata
PCR konvensional ialah teknik pertama yang dibangunkan untuk menguatkan serpihan DNA tertentu. PCR bersarang dan PCR masa nyata ialah dua varian PCR konvensional. Terdapat dua tindak balas penguatan berjujukan dan penggunaan dua set primer dalam PCR bersarang. PCR masa nyata dibangunkan untuk mengukur produk PCR yang dikuatkan. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara ujian PCR bersarang konvensional dan masa nyata.
