PCR lwn PCR Masa Nyata
PCR atau tindak balas rantai Polimerase ialah penemuan revolusi dalam biologi molekul moden, yang pertama kali dibangunkan oleh ahli kimia Kary Mullis pada tahun 1983. Ia membolehkan satu jujukan dalam DNA kompleks diperkuatkan untuk analisis. Idea asas PCR ialah dua primer, yang merupakan pelengkap kepada helai bertentangan urutan DNA, berorientasikan satu sama lain; primer menghasilkan helai pelengkap, setiap satu mengandungi primer yang lain. Oleh itu, hasilnya adalah sejumlah besar urutan yang sepadan dengan DNA yang terletak di antara kedua-dua primer. Enzim polimerase DNA digunakan untuk memanjangkan primer dalam PCR. DNA polimerase ialah enzim termostabil, dan ia mempunyai keupayaan untuk bertahan dalam suhu tinggi (94 hingga 95 °C) yang digunakan untuk denaturasi DNA templat.
PCR melibatkan tiga langkah, iaitu, denaturasi pusingan berulang, penyepuhlindapan primer, dan sintesis DNA. Mesin thermocycler digunakan untuk melakukan tindak balas ini supaya ia boleh diprogramkan untuk menukar suhu dengan cepat dan tepat. Aplikasi PCR ialah penyiasatan jenayah, cap jari DNA, pengesanan patogen dan analisis DNA spesies awal manusia.
Apakah itu PCR Konvensional?
Terdapat tiga peringkat utama PCR konvensional, iaitu; Peringkat penguatan DNA, pemisahan PCR, dan pengesanan produk. Pemisahan segmen DNA biasanya dilakukan oleh elektroforesis gel agarose. Produk kemudiannya diwarnakan dengan etheiduim bromida. Akhirnya, pengesanan dicapai dengan visualisasi jalur pada gel di bawah cahaya UV. Oleh itu, keputusan akhir PCR konvensional tidak dinyatakan sebagai nombor. Biasanya PCR konvensional hanya dapat mengesan satu parameter sahaja.
Apakah itu PCR Masa Nyata?
PCR masa nyata boleh mengesan penguatan produk, kerana produk disintesis. Dengan perkembangan teknologi, PCR telah menjadi teknik yang sangat popular, terutamanya untuk pengesanan dan pengenalpastian bakteria dalam makanan. PCR masa nyata menggunakan sistem pewarna pendarfluor dan mesin termos yang dilengkapi dengan keupayaan pengesanan pendarfluor.
Apakah perbezaan antara PCR Konvensional dan PCR Masa Nyata?
• PCR konvensional lebih memakan masa kerana ia menggunakan elektroforesis gel untuk menganalisis produk PCR yang dikuatkan. Sebaliknya, PCR masa nyata kurang memakan masa kerana ia boleh mengesan amplifikasi semasa fasa awal tindak balas.
• PCR masa nyata mengumpul data pada fasa pertumbuhan eksponen PCR manakala PCR tradisional mengumpul data di Titik Akhir tindak balas.
• Keputusan titik akhir PCR konvensional mungkin tidak begitu tepat, tetapi keputusan PCR masa nyata adalah sangat tepat.
• PCR masa nyata lebih sensitif daripada PCR konvensional.
• PCR konvensional mempunyai peleraian yang sangat lemah manakala PCR masa nyata boleh mengesan perubahan yang sangat sedikit disebabkan peleraian yang tinggi.
• Pengesanan titik akhir PCR konvensional mempunyai julat dinamik pendek manakala pengesanan PCR masa nyata mempunyai julat dinamik yang luas.
• Tidak seperti PCR konvensional, teknik pengesanan automatik ditemui dalam PCR masa nyata.
• PCR konvensional adalah sangat canggih dan intensif buruh lebih daripada PCR masa nyata.
• Tidak seperti PCR masa nyata, PCR konvensional tidak boleh membezakan antara bakteria mati dan hidup.
• PCR masa nyata menggunakan sistem pewarna pendarfluor untuk mengesan produk manakala PCR konvensional menggunakan etidium bromida dan cahaya UV untuk menggambarkan jalur dalam medium gel agarose.
