Perbezaan utama antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik ialah pemfokusan kromat ialah sejenis kaedah kromatografi lajur yang menggunakan resin penukar ion manakala pemfokusan isoelektrik ialah sejenis teknik elektroforesis yang menggunakan gel kecerunan pH yang tidak bergerak.
Chromatofocusing dan isoelektrik fokus ialah dua teknik yang memisahkan protein mengikut titik isoelektriknya. Pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik mempunyai kuasa penyelesaian yang hebat. Pemfokusan kromato ialah kaedah kromatografi lajur resolusi tinggi manakala pemfokusan isoelektrik ialah kaedah pemisahan elektroforesis. Selain itu, pemfokusan kromato tidak menggunakan medan elektrik manakala pemfokusan isoelektrik memerlukan medan elektrik.
Apakah Chromatofocusing?
Chromatofocusing ialah sejenis kromatografi elusi tinggi yang mengasingkan protein mengikut perbezaan titik isoelektriknya. Ia menggunakan lajur resin penukar ion dan kecerunan pH yang dibangunkan secara dalaman. Tidak seperti pemfokusan isoelektrik, pemfokusan kromato tidak melibatkan medan elektrik. Pemfokusan kromato ialah teknik penulenan yang berkuasa yang boleh menyelesaikan molekul yang sangat serupa walaupun hanya berbeza sebanyak 0.02 unit pH. Oleh itu, pemfokusan kromato paling sesuai sebagai langkah penggilap akhir apabila resolusi tinggi diperlukan dalam mengasingkan komponen yang hampir serupa.
Dalam pemfokusan kromato, sampel digunakan pada lajur dengan mencampurkannya dengan penimbal permulaan. Protein yang berada pada pH di atas titik isoelektriknya bercas negatif dan ia kekal berhampiran bahagian atas lajur manakala protein lain yang berada pada pH di bawah titik isoelektriknya, berhijrah ke bawah lajur. Protein yang mempunyai titik isoelektrik tertinggi dielusi dahulu manakala protein dengan titik isoelektrik terendah dielusi terakhir dari lajur. Teknik ini dipengaruhi oleh beberapa faktor seperti pemendakan protein dan kelinearan kecerunan pH.
Apakah Pemfokusan Isoelektrik?
Pemusatan isoelektrik ialah teknik yang memisahkan molekul berbeza berdasarkan titik isoelektriknya. Ia juga dikenali sebagai elektrofokus. Teknik ini sering digunakan untuk pemisahan protein dalam gel. Dalam pemfokusan isoelektrik, sampel ditambah ke dalam gel kecerunan pH (IPG) tidak bergerak. Gel IPG ialah matriks gel akrilamida yang dikopolimerkan dengan kecerunan pH. Protein berhijrah ke arah katod sehingga mereka menemui kawasan pH titik isoelektriknya. Apabila protein mencapai pH yang tidak mempunyai cas bersih, penghijrahan terhenti dan memberikan jalur pegun. Begitu juga, setiap protein memberikan jalur pada satu titik dalam kecerunan pH yang sepadan dengan titik isoelektriknya.
Rajah 01: Pemfokusan Isoelektrik
Pemusatan isoelektrik ialah langkah pertama elektroforesis gel dua dimensi. Dalam teknik itu, protein mula-mula diasingkan mengikut titik isoelektriknya dengan pemfokusan isoelektrik dan kemudian dipisahkan oleh berat molekulnya melalui SDS-PAGE.
Apakah Persamaan Antara Pemfokusan Kromato dan Pemfokusan Isoelektrik?
- Pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik ialah dua kaedah penyelesaian yang sangat baik.
- Kedua-duanya adalah berdasarkan titik isoelektrik protein.
- Teknik ini menggunakan kecerunan pH.
- Kedua-dua prosedur adalah bermaklumat untuk pencirian varian hemoglobin manusia.
- Ia boleh menyelesaikan molekul yang nilai pI berbeza sekurang-kurangnya 0.02 unit pH.
Apakah Perbezaan Antara Pemfokusan Kromato dan Pemfokusan Isoelektrik?
Chromatofocusing ialah teknik kromatografi lajur resolusi tinggi yang mengasingkan protein mengikut titik isoelektriknya. Sebaliknya, pemfokusan isoelektrik ialah teknik elektroforesis yang memisahkan protein mengikut titik isoelektriknya dengan menggunakan medan elektrik di sepanjang kecerunan pH yang terbentuk dalam kapilari. Jadi, ini ialah perbezaan utama antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik.
Perbezaan lain antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik ialah pemfokusan kromato tidak melibatkan medan elektrik manakala pemfokusan isoelektrik memerlukan medan elektrik.
Ringkasan – Pemfokusan kromato lwn Pemfokusan Isoelektrik
Pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik ialah dua teknik serupa yang mempunyai keupayaan penyelesaian molekul yang tinggi, terutamanya molekul yang hampir serupa. Pemfokusan kromato ialah teknik kromatografi lajur resolusi tinggi manakala pemfokusan isoelektrik ialah kaedah elektroforesis. Pemfokusan kromato tidak melibatkan medan elektrik, tidak seperti pemfokusan isoelektrik. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara pemfokusan kromato dan pemfokusan isoelektrik.
