Perbezaan utama antara terjemahan nick dan pengisian akhir ialah terjemahan nick ialah proses yang mencipta probe DNA berlabel untuk pelbagai tindak balas hibridisasi manakala pengisian akhir ialah teknik yang mencipta serpihan tumpul dengan menambahkan nukleotida ke dalam overhang beruntai tunggal.
Terjemahan nick dan pengisian akhir ialah dua teknik yang digunakan dalam biologi molekul. Terjemahan Nick digunakan untuk melabelkan probe untuk hibridisasi untuk mengesan jujukan nukleotida tertentu. Pengisian hujung digunakan untuk membuat serpihan tumpul yang mempunyai hujung melekit dengan gantungan bertali tunggal. Kedua-dua teknik mempunyai kepentingan yang besar, dan ia dilakukan secara rutin dalam makmal penyelidikan molekul.
Apakah Terjemahan Nick?
Terjemahan Nick ialah teknik penting yang digunakan untuk menyediakan probe berlabel untuk pelbagai teknik biologi molekul seperti blotting, hibridisasi in situ, hibridisasi in situ fluorescent, dll. Ia adalah kaedah pelabelan DNA in vitro. Probe DNA digunakan untuk mengenal pasti urutan DNA atau RNA tertentu. Dengan bantuan kuar berlabel, serpihan tertentu boleh ditanda atau divisualisasikan daripada campuran kompleks asid nukleik. Oleh itu kuar berlabel disediakan menggunakan pelbagai teknik. Terjemahan Nick ialah satu kaedah sedemikian yang menghasilkan probe berlabel dengan bantuan enzim DNase 1 dan DNA polimerase 1.
Rajah 01: Terjemahan Nick
Proses terjemahan Nick bermula dengan aktiviti enzim DNase 1. DNase 1 memperkenalkan samaran kepada tulang belakang fosfat DNA untai dua dengan membelah ikatan fosfodiester antara nukleotida. Setelah samaran dicipta, kumpulan 3′ OH bebas nukleotida akan dihasilkan, dan enzim DNA polimerase 1 akan bertindak ke atasnya. Aktiviti exonuclease 5' hingga 3' DNA polimerase 1 menghilangkan nukleotida dari samaran ke arah 3' untaian DNA.
Serentak, aktiviti polimerase enzim DNA polimerase 1 berfungsi dan menambah nukleotida untuk menggantikan nukleotida yang dibuang. Jika nukleotida dilabel, penggantian akan berlaku oleh nukleotida berlabel, dan ia akan menandakan DNA untuk dikenal pasti. Akhir sekali, DNA berlabel yang baru disintesis ini boleh digunakan sebagai probe dalam pelbagai tindak balas hibridisasi.
Apakah Pengisian Akhir?
Pengisian akhir ialah teknik yang digunakan dalam biologi molekul untuk membuat serpihan tumpul. Pencernaan sekatan menghasilkan serpihan dengan overhang. Serpihan ini mungkin tidak serasi untuk diikat menjadi vektor plasmid. Vektor selalunya ditumpulkan untuk membolehkan hujung yang tidak serasi dicantumkan. Oleh itu, serpihan yang tidak terjual boleh ditumpulkan dengan menambah nukleotida pada helai pelengkap menggunakan tidak terjual sebagai templat untuk pempolimeran. Proses ini dikenali sebagai pengisian akhir.
Polymerase DNA seperti serpihan Klenow DNA Polimerase I dan T4 DNA Polymerase memangkinkan pengisian hujung. Mereka menambah nukleotida untuk diisi (5′ → 3′) dan mengunyah kembali (3′ → 5′). Sebaik sahaja hujung melekit diisi, ia menjadi tumpul dan sedia untuk diikat menjadi vektor.
Tambahan pula, pengisian hujung boleh digunakan untuk melabel molekul DNA. Walau bagaimanapun, ia hanya boleh digunakan untuk melabel molekul DNA dengan hujung melekit. Berbanding dengan terjemahan nick, pengisian akhir adalah kaedah yang lebih lembut yang jarang menyebabkan pecahan DNA.
Apakah Persamaan Antara Terjemahan Nick dan Pengisian Akhir?
- Kedua-dua terjemahan nick dan pengisian akhir adalah teknik biologi molekul.
- Ia boleh digunakan untuk melabelkan probe.
- Kedua-duanya dalam vitro
Apakah Perbezaan Antara Terjemahan Nick dan Pengisian Akhir?
Terjemahan Nick ialah teknik yang mencipta probe berlabel untuk penghibridan. Sebaliknya, pengisian akhir ialah teknik yang mencipta serpihan tumpul untuk pengikatan menjadi vektor. Jadi, ini adalah perbezaan utama antara terjemahan nick dan pengisian akhir. Tambahan pula, terjemahan Nick memerlukan penggunaan aktiviti exonuclease 5’hingga 3′ manakala pengisian akhir tidak memerlukan aktiviti exonuclease 5’hingga 3′.
Infografik di bawah menjadualkan perbezaan antara terjemahan nama panggilan dan pengisian akhir dengan lebih terperinci.
Ringkasan – Terjemahan Nick lwn Pengisian Akhir
Terjemahan Nick ialah kaedah yang menggabungkan nukleotida berlabel radio ke dalam DNA. Ia mensintesis kuar berlabel berdasarkan aktiviti enzim DNase 1 dan E. coli DNA polimerase 1. Pengisian akhir, sebaliknya, adalah teknik yang menghasilkan serpihan tumpul. Apabila serpihan mempunyai hujung melekit (tergantung satu untai), ia adalah perlu untuk menjadikannya hujung tumpul untuk diikat menjadi vektor. Pengisian akhir menambah nukleotida yang serasi dan mencipta serpihan hujung yang tumpul untuk menjadikannya serasi untuk pengikatan. Oleh itu, ini meringkaskan perbezaan antara terjemahan nick dan pengisian akhir.
