Perbezaan Utama – Terjemahan Nick lwn Sambungan Primer
Terjemahan nick dan sambungan primer ialah dua teknik penting yang dilakukan dalam biologi Molekul. Perbezaan utama antara terjemahan nick dan sambungan primer ialah proses terjemahan nick menghasilkan probe berlabel untuk teknik hibridisasi lain manakala kaedah sambungan primer mengenal pasti urutan RNA tertentu daripada campuran dan mendedahkan maklumat tentang ekspresi mRNA. Kedua-dua teknik mempunyai kepentingan yang besar dan dilakukan secara rutin dalam makmal penyelidikan molekul.
Apakah Terjemahan Nick?
Terjemahan nick ialah teknik penting yang digunakan untuk menyediakan probe berlabel untuk pelbagai teknik biologi molekul seperti blotting, hibridisasi in situ, hibridisasi in situ fluorescent dll. Ia adalah kaedah in vitro pelabelan DNA. Probe DNA digunakan untuk mengenal pasti urutan DNA atau RNA tertentu. Dengan bantuan kuar berlabel, serpihan tertentu boleh ditanda atau divisualisasikan daripada campuran kompleks asid nukleik. Oleh itu, kuar berlabel disediakan menggunakan pelbagai teknik untuk digunakan untuk teknik yang berbeza. Terjemahan Nick ialah satu kaedah sedemikian yang menghasilkan probe berlabel dengan bantuan enzim DNase 1 dan DNA polimerase 1.
Proses terjemahan nama samaran bermula dengan aktiviti enzim DNase 1. DNase 1 memperkenalkan torehan dalam tulang belakang fosfat DNA terkandas berganda dengan membelah ikatan fosfodiester antara nukleotida. Setelah samaran dicipta kumpulan 3’ OH bebas nukleotida akan terhasil dan enzim DNA polimerase 1 akan bertindak ke atasnya. Aktiviti exonuclease 5’ hingga 3’ DNA polimerase 1 mengeluarkan nukleotida dari samaran ke arah 3’ untaian DNA. Pada masa yang sama, aktiviti polimerase enzim DNA polimerase 1 berfungsi dan menambah nukleotida untuk menggantikan nukleotida yang dikeluarkan. Jika nukleotida dilabelkan, penggantian akan berlaku oleh nukleotida berlabel dan ia akan menandakan DNA untuk dikenal pasti. DNA berlabel yang baru disintesis ini boleh digunakan sebagai probe dalam pelbagai tindak balas hibridisasi dalam Biologi Molekul.
Rajah 01: Proses terjemahan Nick
Apakah itu Sambungan Primer?
Primer extension ialah teknik yang digunakan untuk mencari jujukan RNA tertentu daripada campuran RNA dan mencari hujung 5’ transkrip mRNA. Ia juga digunakan untuk mengkaji struktur RNA dan ekspresi. Kaedah lanjutan primer dijalankan dengan primer berlabel atau dengan nukleotida berlabel. Jika primer berlabel digunakan, ia tidak termasuk keperluan pelabelan nukleotida yang digunakan untuk sintesis cDNA. Terdapat beberapa langkah dalam teknik ini. Ia bermula dengan pengekstrakan RNA daripada sampel. Kemudian primer oligonukleotida berlabel ditambah kepada campuran bersama-sama dengan bahan-bahan yang diperlukan untuk mensintesis cDNA bagi urutan RNA tertentu. Sepuh primer dengan urutan pelengkap daripada campuran. Menggunakan urutan anil primer sebagai templat, enzim reverse transcriptase mensintesis DNA pelengkap (cDNA) bagi jujukan RNA. Penyepuhlindapan primer dan transkripsi terbalik berlaku hanya apabila jujukan RNA khusus terdapat dalam sampel. Akhirnya, apabila elektroforesis gel denaturasi dilakukan, saiz jujukan RNA boleh ditentukan. Ia juga mudah untuk mencari asas +1 bagi jujukan mRNA (tapak permulaan transkripsi) dengan kaedah sambungan primer. Jumlah mRNA yang terdapat dalam sampel boleh dikira dengan kaedah ini jika lebihan primer digunakan.
Rajah 02: Sambungan primer
Apakah perbezaan antara Terjemahan Nick dan Sambungan Primer?
Terjemahan Nick lwn Sambungan Primer |
|
| Terjemahan Nick ialah proses yang mencipta probe DNA berlabel untuk pelbagai tindak balas hibridisasi. | Pelanjutan primer ialah teknik yang digunakan untuk mencari RNA tertentu atau untuk mengkaji ekspresi gen. |
| Enzim Digunakan | |
| Dnase 1 dan enzim DNA polimerase digunakan. | Enzim transkripase terbalik digunakan. |
| Kepentingan | |
| Terjemahan Nick memudahkan penandaan urutan DNA tertentu. | Pelanjutan primer membolehkan pengesanan saiz jujukan mRNA tertentu dan jumlah yang terdapat dalam sampel. |
Ringkasan – Terjemahan Nick lwn Sambungan Primer
Terjemahan Nick ialah kaedah yang digunakan untuk mensintesis probe berlabel berdasarkan aktiviti enzim DNase 1 dan E coli DNA polimerase 1. Ia adalah kaedah in vitro yang digunakan di makmal sebelum teknik hibridisasi yang berbeza. Semasa terjemahan nick, aktiviti exonuclease 5'-3' DNA polimerase 1 membuang nukleotida mendahului nick dan aktiviti polimerase DNA polimerase 1 menggantikan nukleotida yang dikeluarkan dengan nukleotida berlabel di belakang nick. Sambungan primer ialah kaedah yang digunakan untuk mengesan transkrip RNA tertentu daripada campuran dan mengukur saiz dan jumlah RNA minat. Ini ialah perbezaan antara terjemahan nick dan sambungan primer.
