Perbezaan Utama – HPLC lwn HPTLC
Perbezaan utama antara HPLC dan HPTLC ialah HPLC membenarkan pengasingan kuantitatif komponen dalam sampel manakala HPTLC tidak membenarkan pengasingan kuantitatif komponen dalam sampel.
Kromatografi ialah kaedah pengasingan fizikal yang digunakan untuk mengasingkan dan mengenal pasti komponen dalam campuran. Kedua-dua HPLC dan HPTLC adalah teknik kromatografi. HPLC ialah kromatografi cecair berprestasi tinggi. HPTLC ialah kromatografi lapisan nipis berprestasi tinggi.
Apakah itu HPLC?
HPLC ialah kromatografi cecair berprestasi tinggi. Ia adalah teknik analisis yang digunakan untuk mengasingkan, mengenal pasti dan mengira komponen dalam campuran. Dalam teknik ini, sampel dilarutkan dalam pelarut yang sesuai. Kemudian pelarut dengan sampel disalurkan melalui pam dengan tekanan tertentu. Pam diisi dengan bahan penjerap pepejal. Kemudian beberapa komponen mengikat kuat pada bahan penyerap manakala komponen lain mengikat longgar. Ini menyebabkan komponen mempunyai kadar aliran yang berbeza melalui pam. Oleh itu, komponen boleh diasingkan dengan mudah.
Rajah 01: Sistem HPLC
Bahan penjerap yang mengisi pam dikenali sebagai fasa pegun. Pelarut dengan sampel terlarut dikenali sebagai fasa bergerak. Pam yang digunakan dalam teknik ini dipanggil lajur. Lajur diisi dengan bahan penjerap, paling biasa, zarah silika. Saiz zarah ini mungkin berkisar antara 2-50 μm. Proses pemisahan dipengaruhi oleh komposisi fasa mudah alih dan suhu sistem. Interaksi antara fasa pegun dan komponen dalam sampel boleh menjadi interaksi hidrofobik, interaksi dipol-dipol, ikatan ionik, dsb.
Tekanan operasi HPLC jauh lebih tinggi daripada kromatografi cecair tradisional. Ia terletak sekitar 50-350 bar. Perbezaan antara kromatografi cecair dan HPLC ialah dalam kromatografi cecair, sampel jatuh melalui lajur di bawah graviti manakala, dalam HPLC, sampel bertekanan melalui lajur. Saiz lajur dan zarah penyerap juga sangat kecil jika dibandingkan dengan kromatografi cecair tradisional. Walau bagaimanapun, resolusi yang diberikan oleh teknik HPLC adalah lebih baik.
Apakah itu HPTLC?
HPTLC ialah kromatografi lapisan nipis berprestasi tinggi. Ia adalah bentuk lanjutan dan automatik bagi TLC tradisional. Teknik ini memberikan resolusi yang cekap dalam tempoh masa yang singkat. Dalam kaedah analisis ini, sampel dan rujukan boleh dianalisis pada masa yang sama, yang membolehkan sampel dibandingkan dengan rujukan. Ia memberikan ketepatan analisis yang lebih baik daripada teknik kromatografi lain. Masa yang diambil untuk analisis adalah kurang. Teknik ini ialah teknik kos rendah.
Rajah 02: Analisis Pewarna Makanan menggunakan HPTLC
Kaedah HPTLC ialah proses yang mudah, dan langkah penyediaan sampel juga dihapuskan (Dalam TLC tradisional, langkah penyediaan sampel disertakan sebelum pengasingan. Langkah ini melibatkan pembersihan dan pengayaan). Pelarut boleh digunakan terus tanpa sebarang pra-rawatan walaupun teknik kromatografi lain memerlukan pra-rawatan seperti penyahgas, penapisan, dsb.
Bahan penjerap yang digunakan dalam HPTLC ialah silika dengan saiz zarah yang sangat kecil. Dalam TLC tradisional, saiz zarah silika ialah 5-20 μm manakala, dalam HPTLC, ia adalah 4-8 μm. Sampel digunakan pada plat HPTLC menggunakan aplikator. Ia memberikan aplikasi seragam dan selamat. Kemudian plat diletakkan di dalam ruang yang mempunyai fasa bergerak. Ruang harus tepu dengan wap fasa mudah alih. Selepas proses HPTLC, bintik-bintik yang telah bergerak dapat dikesan. Apabila mengesan bintik-bintik pada plat, teknik HPTLC menggunakan kawasan UV atau ruang iodin yang sesuai.
Apakah Perbezaan Antara HPLC dan HPTLC?
HPLC lwn HPTLC |
|
| HPLC ialah kromatografi cecair berprestasi tinggi. | HPTLC ialah kromatografi lapisan nipis berprestasi tinggi. |
| Teknik | |
| Dalam HPLC, fasa mudah alih dengan pelarut disalurkan melalui lajur yang diisi dengan fasa pegun. | Dalam HPTLC, sampel dikesan pada plat TLC dan diletakkan di dalam ruang yang mengandungi fasa bergerak; kemudian sampel dibenarkan untuk berhijrah ke atas plat bersama-sama dengan fasa mudah alih. |
| Ukuran | |
| Dalam HPLC, perbezaan antara kadar aliran komponen melalui lajur digunakan untuk mengasingkan komponen dalam sampel. | Dalam HPTLC, perbezaan antara jarak yang dilalui oleh setiap komponen dalam sampel digunakan untuk mengasingkan komponen dalam sampel. |
| Pemisahan Kuantitatif | |
| HPLC membenarkan pengasingan kuantitatif komponen dalam sampel. | HPTLC tidak membenarkan pengasingan kuantitatif komponen dalam sampel. |
Ringkasan – HPLC lwn HPTLC
HPLC dan HPTLC ialah dua teknik kromatografi. Perbezaan utama antara HPLC dan HPTLC ialah HPLC membenarkan pengasingan kuantitatif komponen dalam sampel manakala HPTLC tidak membenarkan pengasingan kuantitatif komponen dalam sampel.
