Perbezaan utama antara RP HPLC dan HIC ialah RP HPLC menggunakan fasa mudah alih yang lebih polar dan fasa pegun yang kurang polar. Manakala, HIC menggunakan fasa pegun hidrofobik yang membolehkan molekul hidrofobik melekat padanya.
Kromatografi ialah teknik analisis yang membantu mengasingkan campuran kepada komponennya. Pertama, kita perlu melarutkan sampel untuk diasingkan menjadi larutan. Campuran larutan-bahan ini dipanggil fasa bergerak. Kemudian fasa bergerak melalui bahan lain yang dipanggil fasa pegun. Fasa pegun menentukan pemisahan komponen. Pemisahan berlaku disebabkan oleh pembahagian bahan antara fasa bergerak dan fasa pegun.
Apakah itu RP HPLC?
Istilah RP HPLC ialah singkatan kepada Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi Fasa Terbalik. Ia melibatkan pengasingan komponen dalam campuran, mengikut hidrofobisiti. Komponen hidrofobik dalam fasa mudah alih dihubungkan dengan ligan hidrofobik tidak bergerak pada fasa pegun, manakala komponen hidrofilik mencairkan melalui fasa pegun tanpa melekat pada permukaan fasa pegun.
Rajah 01: Radas HPLC
Selain itu, kaedah ini mempunyai lebih banyak kebolehulangan berbanding teknik kromatografi lain, dan ia juga menunjukkan kebolehgunaan yang luas. Oleh itu, kami menggunakan kaedah ini di makmal untuk lebih 75% daripada semua kaedah HPLC. Selalunya, kami menggunakan campuran akueus air dengan pelarut organik polar yang boleh dicampur sebagai fasa bergerak. Oleh itu, ia akan memastikan lekatan komponen hidrofobik dalam larutan ke permukaan fasa pegun.
Apakah itu HIC?
Istilah HIC ialah singkatan daripada Hydrophobic Interaction Chromatography. Ia adalah sejenis HPLC fasa terbalik, dan kaedah ini digunakan terutamanya untuk pemisahan biomolekul besar seperti protein. Dalam kaedah ini, kita perlu menggunakan medium akueus untuk membuat sampel biomolekul. Ini kerana pelarut organik boleh menyebabkan denaturasi protein. Selain itu, teknik ini menggunakan interaksi antara molekul besar dengan permukaan sedikit hidrofobik fasa pegun. Tambahan pula, kita perlu menggunakan kepekatan garam yang tinggi dalam sampel kerana ia menggalakkan protein dikekalkan pada pembungkusan; proses ini dipanggil s alting out. Dengan mengurangkan kepekatan garam secara beransur-ansur, kita boleh membuat biomolekul elusi secara berasingan mengikut hidrofobisitinya.
Biasanya, kaedah ini menggunakan keadaan yang bertentangan dengan keadaan kromatografi pertukaran ion. Dalam teknik ini, pertama, kita perlu melepasi larutan penimbal melalui lajur untuk mengurangkan pelarutan zat terlarut dalam sampel. Ia menjadikan kawasan hidrofobik protein terdedah. Walau bagaimanapun, apabila molekul lebih hidrofobik, kurang garam diperlukan untuk menggalakkan pengikatan. Di sini, zat terlarut yang kurang hidrofobik dicairkan terlebih dahulu, dan mengikut perubahan kepekatan garam, lebih banyak zat terlarut hidrofobik dicairkan terakhir.
Apakah Perbezaan Antara RP HPLC dan HIC?
Kromatografi ialah teknik analisis untuk pengasingan komponen dalam campuran. RP HPLC dan HIC ialah dua teknik kromatografi khusus. Perbezaan utama antara RP HPLC dan HIC ialah RP HPLC menggunakan fasa mudah alih yang lebih polar dan fasa pegun kurang polar, manakala HIC menggunakan fasa pegun hidrofobik, yang membolehkan molekul hidrofobik melekat padanya.
Maklumat di bawah meringkaskan perbezaan antara RP HPLC dan HIC.
Ringkasan – RP HPLC lwn. HIC
Kromatografi ialah teknik analisis untuk pengasingan komponen dalam campuran. RP HPLC dan HIC ialah dua teknik kromatografi khusus. Perbezaan utama antara RP HPLC dan HIC ialah RP HPLC menggunakan fasa mudah alih yang lebih polar dan fasa pegun kurang polar, manakala HIC menggunakan fasa pegun hidrofobik, yang membolehkan molekul hidrofobik melekat padanya.
