Perbezaan utama FPLC dan HPLC ialah FPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang menulenkan biomolekul besar seperti protein, nukleotida dan peptida, manakala HPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang memisahkan sebatian berat molekul kecil.
Kromatografi cecair ialah teknik yang digunakan untuk mengasingkan sampel kepada komponen individunya. Pemisahan ini berlaku disebabkan oleh interaksi sampel tertentu dengan fasa mudah alih dan pegun. Komponen dalam sampel diasingkan berdasarkan pertalian setiap komponen untuk fasa mudah alih dalam kromatografi cecair. Apabila fasa bergerak dan sampel melalui lajur, komponen sampel mula berpisah kepada jalur yang boleh dikesan oleh spektroskopi UV-VIS. Oleh itu, FPLC dan HPLC ialah dua jenis teknik kromatografi cecair.
Apakah itu FPLC?
FPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang memurnikan biomolekul besar seperti protein, nukleotida dan peptida. Kromatografi cecair protein pantas (FPLC) pertama kali dibangunkan dan dipasarkan di Sweden oleh syarikat Pharmacia pada tahun 1982. Ia sering digunakan untuk menganalisis atau memurnikan campuran protein. Ini berlaku berdasarkan prinsip pertalian komponen sampel untuk bendalir bergerak (fasa bergerak) dan bahan pepejal berliang (fasa pegun). Dalam FPLC, fasa bergerak ialah penampan, dan fasa pegun ialah resin yang terdiri daripada manik. Ia biasanya terdiri daripada agarose berkait silang yang dibungkus ke dalam kaca silinder atau lajur plastik.
Rajah 01: Radas FLPC (Kromatografi Cecair Protein Pantas)
Dalam kebanyakan strategi FLPC, resin pertukaran ion digunakan. Oleh itu, protein yang diminati akan mengikat resin dengan interaksi cas. Teknik FLPC juga menggunakan dua penimbal: penimbal 1 (penampan berjalan) dan penimbal 2 (penampan elusi). Pada mulanya, apabila menjalankan penimbal dan campuran sampel berjalan melalui lajur, protein yang diminati dalam campuran akan mengikat resin dengan interaksi cas. Tetapi protein yang diminati menjadi tercerai dan kembali kepada larutan dalam penimbal elusi apabila penimbal elusi berjalan melalui lajur pada penghujung proses. Kemudian, larutan (eluan yang mengandungi protein yang menarik) melalui dua pengesan, yang mengukur kepekatan garam dan kepekatan protein. Memandangkan setiap protein dielusi, ia muncul sebagai "puncak" semasa pengesanan dan boleh dikumpulkan untuk kegunaan selanjutnya.
Apakah itu HPLC?
HPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang mengasingkan sebatian berat molekul kecil. Pada tahun 1969, HPLC pertama telah dikeluarkan secara komersial oleh Waters Corporation, Amerika Syarikat. Dalam kromatografi cecair (HPLC) berprestasi tinggi, campuran sampel (analit) dalam pelarut (fasa mudah alih) dipam melalui lajur dengan bahan pembungkus kromatografi (fasa pegun) pada tekanan tinggi. Campuran sampel dibawa oleh aliran gas pembawa bergerak helium atau nitrogen.
Rajah 02: HPLC (Kromatografi Cecair Berprestasi Tinggi)
Komponen dalam campuran sampel yang mempunyai jumlah interaksi paling sedikit dengan fasa pegun atau jumlah interaksi paling banyak dengan fasa mudah alih akan keluar dari lajur dengan lebih cepat. Sebaliknya, komponen dalam campuran sampel yang mempunyai jumlah interaksi paling banyak dengan fasa pegun atau jumlah interaksi paling sedikit dengan fasa mudah alih akan keluar dari lajur dengan lebih perlahan. Berdasarkan prinsip interaksi di atas, komponen campuran sampel boleh diasingkan. Selain itu, pengesan instrumen mengenal pasti setiap komponen campuran sampel yang keluar dari lajur. HPLC digunakan untuk memeriksa sampel alam sekitar dan biologi sama ada terdapat atau tiada sebatian yang diketahui, seperti dadah, toksin atau racun perosak. Ia digunakan dalam industri yang berbeza seperti farmaseutikal, alam sekitar, forensik dan bahan kimia.
Apakah Persamaan Antara FPLC dan HPLC?
- FPLC dan HPLC ialah jenis kromatografi cecair.
- Kedua-duanya digunakan untuk memisahkan dan mengenal pasti sampel biologi.
- Ia mempunyai fasa mudah alih cecair dan fasa pegun pepejal.
- Kedua-dua teknik menggunakan lajur untuk melepasi sampel.
- Teknik ini menggunakan pam, pengesan, injap dan perisian untuk pengasingan dan pengesanan sampel.
Apakah Perbezaan Antara FPLC dan HPLC?
FPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang digunakan untuk membersihkan biomolekul besar seperti protein, nukleotida dan peptida. HPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang digunakan untuk memisahkan sebatian berat molekul kecil. Jadi, ini adalah perbezaan utama antara FPLC dan HPLC. Selain itu, FPLC menggunakan pemantau pH dan kekonduksian serta telaga sebagai pengumpul pecahan. Sebaliknya, HPLC tidak menggunakan pemantau pH dan kekonduksian serta pengumpul pecahan.
Maklumat di bawah menyenaraikan lebih banyak perbezaan antara FPLC dan HPLC dalam bentuk jadual.
Ringkasan – FPLC lwn HPLC
Kromatografi ialah teknik analisis makmal yang digunakan untuk pengasingan komponen daripada campuran. Ia terbahagi kepada beberapa jenis seperti kromatografi lajur, kromatografi gas, kromatografi cecair, kromatografi pertukaran ion, dll. FPLC dan HPLC ialah dua jenis teknik kromatografi cecair. FPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang digunakan untuk membersihkan biomolekul besar seperti protein, nukleotida, dan peptida. Sebaliknya, HPLC ialah sejenis kromatografi cecair yang digunakan untuk memisahkan sebatian berat molekul kecil. Oleh itu, ini ialah ringkasan tentang perbezaan antara FPLC dan HPLC.
