Perbezaan Utama – Gel Penyusun vs Gel Pemisah
Istilah gel susun dan gel pemisah digunakan dalam menerangkan teknik SDS-PAGE. SDS-PAGE atau elektroforesis gel sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ialah teknik makmal yang digunakan untuk mengasingkan molekul protein berdasarkan berat molekulnya. Teori di sebalik teknik ini ialah protein dengan berat molekul yang berbeza menunjukkan kadar migrasi yang berbeza; molekul berat molekul rendah berhijrah lebih cepat manakala molekul berat molekul tinggi berhijrah secara perlahan. Medium untuk migrasi ialah gel. Terdapat dua jenis gel yang dinamakan sebagai gel susun dan gel pemisah. Perbezaan utama antara gel susun dan gel pengasing ialah pH gel penumpuk ialah 6.8 manakala pH gel pengasing ialah 8.8.
Apakah Stacking Gel?
Gel susun ialah gel poliakrilamida pekat rendah yang diletakkan di bahagian atas gel pelarut yang lebih pekat (gel pemisah) dalam teknik SDS-PAGE. Gel tindanan digunakan untuk meningkatkan resolusi elektroforesis. Resolusi meningkat kerana perbezaan antara kepekatan gel tindanan dan gel penyelesaian yang memberi kesan kepada protein dalam sampel. Oleh kerana kepekatan poliakrilamida dalam gel susun adalah rendah, saiz liang lebih tinggi. Ini juga membantu dalam meningkatkan pemisahan.
Gel penyusun ialah gel poliakrilamida longgar dengan liang besar kira-kira 7% poliakrilamida. Liang-liang ini tidak bertindak sebagai penghalang yang besar untuk molekul protein yang besar. Oleh itu gel ini memberi kesan sedikit pada mobiliti protein tersebut. Ini menjadikan pemisahan mengikut mobiliti dan saiz protein dengan menumpukan mereka di antara dua gel.
Rajah 01: Gel Akrilamida SDS-PAGE
PH bagi gel penyusun ialah 6.8. pHnya adalah berasid daripada gel pelarut dengan 2 unit pH. pH ini membayangkan kekuatan ion yang lebih rendah justeru rintangan elektrik yang lebih tinggi. Ini menimbulkan mobiliti protein daripada zarah bercas lain yang terdapat dalam gel.
Apakah Gel Pemisah?
Gel pemisah atau gel pelarut bagi teknik SDS-PAGE ialah gel poliakrilamida pekat tinggi yang diletakkan di atas gel tindanan pekat rendah. Gel pemisah mengandungi jumlah polyacrylamide (10%) yang tinggi. pH gel ini dikekalkan sebagai pH=8.8, iaitu tahap pH yang lebih tinggi daripada gel penyusun.
Rajah 02: Alat Elektroforesis Gel
Apabila molekul protein mencapai gel pemisah, penghijrahan molekul tersebut menjadi perlahan kerana gel pemisah adalah gel berkepekatan tinggi dengan saiz liang kecil yang boleh bertindak sebagai penghalang yang besar untuk pergerakan molekul protein.. Perlahan ini membolehkan protein lain berhijrah perlahan-lahan untuk mengejar, menghasilkan jalur sempit dan pekat di antara kedua-dua gel.
Apakah Hubungan Antara Gel Susun dan Gel Pemisah?
Kedua-dua jenis Gel Susun dan Gel Pemisah digunakan dalam radas yang sama
Apakah Perbezaan Antara Gel Susun dan Gel Pemisah?
Gel Susun lwn Gel Pemisah |
|
| Gel tindanan ialah gel poliakrilamida pekat rendah yang diletakkan di atas gel pelarut yang lebih pekat (gel pemisah) dalam teknik SDS-PAGE. | Gel pemisah atau gel pelarut teknik SDS-PAGE ialah gel poliakrilamida pekat tinggi yang diletakkan di bahagian atas gel penyusun pekat rendah. |
| Peletakan | |
| Gel tindanan diletakkan pada gel pelarut (pemisah). | Gel pemisah diletakkan di bahagian bawah bekas yang digunakan untuk elektroforesis gel. |
| Kepekatan | |
| Kepekatan gel susun adalah tinggi. | Kepekatan gel pengasing adalah rendah. |
| Kandungan Poliakrilamida | |
| Gel tindanan mengandungi kira-kira 7% poliakrilamida. | Gel pemisah mengandungi kira-kira 10% poliakrilamida. |
| pH | |
| Ph gel penyusun ialah 6.8. | PH bagi gel pengasing ialah 8.8. |
| Saiz Liang | |
| Saiz liang besar terdapat dalam gel tindanan. | Saiz liang kecil terdapat dalam gel pengasing. |
| Resolusi | |
| Gel tindanan memberikan resolusi yang lebih baik. | Gel pemisah memberikan resolusi yang lemah. |
Ringkasan – Gel Penyusun lwn Gel Pemisah
Gel penyusun dan gel pemisah ialah dua jenis gel poliakrilamida yang digunakan untuk mendapatkan pemisahan molekul protein yang lebih baik dalam sampel tertentu. Perbezaan antara gel susun dan gel pengasing ialah pH gel susun ialah 6.8 manakala pH gel pengasing ialah 8.8.
