Perbezaan Antara Benzonase dan DNase

2024 Pengarang: Alex Aldridge | [email protected]. Diubah suai terakhir: 2023-12-17 13:46

Perbezaan Utama – Benzonase lwn DNase

Degradasi asid nukleik adalah penting untuk banyak teknik biologi molekul. Ia digunakan secara meluas dalam teknologi DNA rekombinan untuk menyingkirkan serpihan DNA dan RNA yang tidak diingini. Enzim pengurai asid nukleik dirujuk sebagai Nuklease, dan ia boleh terdiri daripada pelbagai jenis berdasarkan fungsi yang diperlukan. Nuklease yang merendahkan DNA dikenali sebagai DNase manakala yang merendahkan RNA dikenali RNases. Enzim ini kebanyakannya digunakan dalam eksperimen in vitro di mana ujian molekul in vitro dijalankan untuk mengasingkan DNA tulen, RNA atau protein. Benzonases adalah sejenis nuklease yang merendahkan kedua-dua DNA dan RNA manakala DNase merendahkan DNA sahaja. Ini ialah perbezaan utama antara Benzonase dan DNase.

Apakah Benzonase?

Benzonase ialah endonuklease hasil kejuruteraan genetik daripada Serratia marcescens. Enzim ini dihasilkan dalam perumah E. coli dalam skala industri. Benzonase mampu membelah DNA untai dua, DNA linear, DNA bulat dan RNA untai tunggal. Oleh itu Benzonase adalah penting secara komersial. Enzim benzonase ialah dimer protein yang mempunyai 245 asid amino yang sama, ~30 subunit kDa dengan dua ikatan disulfida penting. Benzonase membelah asid nukleik pada hujung 5' dan menghasilkan serpihan dengan hujung 5' bebas. Benzonase boleh membelah asid nukleik pada sebarang jujukan tetapi lebih suka kawasan yang kaya dengan GC.

Benzonase disimpan pada -20 ^{0C. pH optimum untuk aktiviti enzim didapati ialah 8.0 – 9.2. Aplikasi Benzonase termasuk penyediaan sampel untuk elektroforesis gel 2D protein di mana Benzonase menyingkirkan asid nukleik terikat dan penyingkiran bahan cemar asid nukleik daripada persediaan protein rekombinan. Ia juga digunakan untuk mengurangkan kelikatan ekstrak protein dan mengelakkan penggumpalan sel dalam campuran sel.}

Apakah itu DNase?

DNase ialah enzim hidrolitik nuklease yang hanya mampu membelah DNA untai dua. Terdapat dua jenis utama DNase: DNase I dan DNase II. DNase I mengambil bahagian dalam membelah DNA untai dua untuk menghasilkan polinukleotida dengan hujung bebas 5’. DNase II terlibat dalam membelah DNA untai dua untuk menghasilkan untaian polinukleotida dengan hujung bebas atau terjuntai 3’.

DNase I

DNase I berfungsi pada pH optimum antara 7.0 – 8.0. Aktiviti enzim bergantung kepada banyak kofaktor ionik termasuk, Ca²⁺, Mg²⁺ atau Mn^{2+Aktiviti Mg}2+ ^{dan Mn}2+ ^{menentukan fungsi DNase I. Dengan kehadiran Mg} 2+^{, DNase I membelah setiap helai dsDNA secara bebas. Ini berlaku secara rawak. Sebaliknya, dengan kehadiran Mn}2+, ^{enzim akan membelah kedua-dua helai DNA pada lebih kurang tapak yang sama. Pecahan ini akan menghasilkan dua jenis serpihan DNA; satu jenis dengan hujung tumpul dan satu lagi jenis dengan satu atau dua nukleotida yang tidak tergantung.}

Rajah 02: DNase

DNase II

DNase II berfungsi pada pH optimum 4.5-5.0 dan ion logam divalen diperlukan untuk aktivitinya, serupa dengan DNase I. Mekanisme DNase II diketahui terdiri daripada tiga langkah utama.

1. Berbilang patah helai tunggal diinduksi dalam tulang belakang DNA.
2. Nukleotida larut asid dan oligonukleotida dihasilkan.
3. Anjakan hiperkromik bukan linear berlaku pada fasa terakhir.

Perencat utama enzim DNase termasuk chelator logam, logam peralihan dan bahan kimia seperti Sodium dodecyl sulfate dan β – mercaptoethanol.

Aplikasi utama DNase termasuk penyediaan ekstrak RNA bebas DNA dan ekstrak protein, dan penyingkiran DNA templat semasa eksperimen transkripsi in vitro.

Apakah Persamaan Antara Benzonase dan DNase?

• Kedua-duanya ialah enzim hidrolitik.
• Kedua-duanya adalah nuklease.
• Kedua-duanya mengambil bahagian dengan membelah ikatan fosfodiester asid nukleik.
• Kedua-duanya memerlukan pH optimum dan suhu penyimpanan untuk mengekalkan aktiviti enzim.
• Perencat enzim termasuk agen pengkelat, logam peralihan dan bahan kimia detergen.
• Aplikasi terutamanya tertumpu pada mendapatkan ekstrak ketulenan tinggi DNA, RNA dan protein.
• Kedua-dua enzim boleh dihasilkan melalui kejuruteraan genetik.

Apakah Perbezaan Antara Benzonase dan DNase?

Benzonase lwn DNase
Benzonase ialah enzim yang mampu membelah DNA untai dua, DNA linear, DNA bulat dan RNA.	DNase ialah enzim yang mampu membelah DNA rantai dua.
Substrat untuk Enzim
DNA dan RNA adalah substrat untuk benzonase.	DNA ialah substrat untuk DNase.
Struktur
Julat pH optimum Benzonase ialah 7.0 -8.0	Julat pH optimum DNase I ialah 7.0 – 8.0 dan DNase II ialah 4.5 – 5.0.

Ringkasan – Benzonase lwn DNase

Enzim nuklease digunakan secara meluas dalam prosedur eksperimen yang berbeza berkaitan dengan biologi molekul dan kejuruteraan genetik. Benzonase dan DNase adalah dua jenis nuklease. Benzonase terlibat dalam merendahkan kedua-dua DNA dan RNA manakala DNase terlibat dalam membelah DNA rantai dua. Ini adalah perbezaan asas antara benzonase dan DNase. Pada masa ini, kedua-dua jenis nuklease ini dihasilkan melalui teknologi DNA rekombinan yang menghasilkan enzim berkualiti tinggi yang dioptimumkan untuk pengeluaran maksimum.

Muat turun Versi PDF Benzonase lwn DNase

Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian seperti dalam nota petikan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan Antara Benzonase dan DNase