Perbezaan Utama – Ligase DNA T4 lwn T7
DNA ligase ialah enzim penting yang digunakan dalam teknik biologi molekul. Ia berfungsi sebagai gam molekul untuk bergabung dengan nukleotida dengan membentuk ikatan fosfodiester antara nukleotida. Ikatan fosfodiester terbentuk di antara hujung hidroksil 3’ bahagian gula dan kumpulan fosfat hujung 5’. Ligase DNA adalah penting dalam proses replikasi untuk menyertai serpihan Okazaki pada untaian tertinggal dan semasa mekanisme pembaikan DNA dan eksperimen pengklonan in vitro untuk menyertai gen yang diingini yang diminati kepada genom vektor. Terdapat dua ligase DNA utama yang digunakan pada masa ini oleh ahli biologi molekul: Ligase DNA T4 dan T7. Ligase DNA T4 adalah salah satu enzim pertama yang diasingkan daripada bakteriofaj T4. Ligase DNA T7, yang merupakan protein yang lebih kecil, adalah enzim yang diasingkan daripada bakteriofaj T7. Ini ialah perbezaan utama antara ligase DNA T4 dan T7.
Apakah Tindakan Ligase DNA?
Pengikatan DNA berlaku dalam tindak balas tiga langkah. Langkah pertama ialah serangan nukleofilik pada alfa-fosforus ATP yang menghasilkan perantaraan enzim-adenilat kovalen di mana AMP dikaitkan dengan nitrogen rantai sisi terminal lisin. Dalam langkah kedua, serangan nukleofilik berlaku pada fosforus enzim-adenilat oleh substrat DNA yang ditamatkan 5'-fosfat, melepaskan lisin dan membentuk DNA-adenylate. Pada langkah terakhir, DNA-adenylate diserang oleh 3’- OH untaian DNA yang lain, melepaskan AMP dan bergabung dengan polinukleotida.
Apakah T4 DNA Ligase?
T4 Ligase ialah ligase pertama yang diasingkan dan dikenal pasti oleh Meselson, Weigle dan Kellenberger dan merupakan ligase komersial pertama yang dihasilkan. Ligase DNA T4 ialah enzim yang bergantung kepada ATP yang memangkinkan pembentukan ikatan fosfodiester. Ia adalah rantai polipeptida tunggal dengan 487 sisa asid amino dan mempunyai berat molekul kira-kira 77 kDa. pH optimum untuk aktivitinya terletak dalam julat 7.5 – 8.
Rajah 01: Ligase DNA T4
T4 DNA Ligase, seperti namanya, terdapat dalam bakteriofaj T4 dan telah diasingkan apabila faj menghasilkan enzim apabila dijangkiti E. coli. Enzim mengikat dupleks DNA untai ganda dengan hujung tumpul dan serpihan yang akan diikat hendaklah berdekatan antara satu sama lain.
Apakah T7 DNA Ligase?
T7 ligase ialah 41 kDa protein yang dihasilkan oleh T7 Bacteriophage dan diasingkan dengan menjangkiti sel E. coli. Fungsi utama ligase T7 adalah untuk mengikat dupleks DNA melalui kaitan fosfodiester dan bergabung dengan serpihan DNA yang berdekatan semasa eksperimen pengklonan.pH optimum untuk ligase DNA T7 terletak dalam julat 7.0 – 7.2. Ligase T7 bergantung kepada ATP. Ligase DNA T7 juga mampu menyepuhlindap DNA dan hibrid RNA, menimbulkan konformasi yang tidak normal semasa transkripsi; namun, fenomena ini masih dalam penyelidikan oleh kajian in vitro.
Apakah Persamaan Antara Ligase DNA T4 dan T7?
- T4 dan T7 DNA Ligase mengambil bahagian dalam tindak balas pengikatan dengan menyepuh dupleks DNA melalui pembentukan ikatan fosfodiester antara hujung 3’ OH dan hujung 5’ fosfat serpihan DNA.
- Kedua-dua enzim mengikat dupleks DNA hujung tumpul yang berdekatan antara satu sama lain.
- Kedua-dua enzim bergantung kepada ATP.
- Enzim ini diasingkan dengan menjangkiti sel E. coli dengan bakteriofaj tertentu.
- Aplikasi kedua-dua enzim termasuk:
- Pengklonan molekul – untuk mengikat gen yang diminati kepada vektor
- Pembaikan DNA – untuk membaiki relung terkandas dua kali
- Replikasi DNA in vitro
- Tindak balas rantai ligase
Apakah Perbezaan Antara Ligase DNA T4 dan T7?
T4 lwn T7 DNA Ligase |
|
| T4 DNA Ligase jenis DNA ligase diasingkan daripada bakteriofaj T4 dan terlibat dalam mengikat serpihan DNA bersebelahan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. | T7 DNA Ligase jenis DNA ligase diasingkan daripada bakteriofaj T7 dan terlibat dalam mengikat serpihan DNA bersebelahan melalui pembentukan ikatan fosfodiester. |
| Saiz Protein | |
| Saiz ligase DNA T4 ialah 77 kDa – lebih besar berbanding ligase DNA T7. | Saiz ligase DNA T7 ialah 41 kDa. |
| pH optimum | |
| Julat pH yang berfungsi T4 DNA ligase ialah 7.5 – 8.0. | julat pH yang berfungsi T7 DNA ligase ialah 7.0 – 7.2. |
Ringkasan – Ligase DNA T4 lwn T7
DNA ligase ialah kelas enzim penting yang terlibat dalam pengklonan molekul untuk menghasilkan molekul DNA rekombinan yang mengandungi gen yang diminati. Tindak balas ligasi ialah tindak balas menggunakan tenaga dan terdapat kajian penyelidikan baru sedang dijalankan untuk meningkatkan ketepatan melalui modulasi ligase yang ada. Ligase DNA T4 dan T7 ialah dua jenis enzim ligase DNA penting yang digunakan dalam teknik biologi molekul. Ligase DNA T7 juga merupakan hasil penyelidikan yang berasaskan ligase primer yang diasingkan daripada E. coli yang dijangkiti T4. T7 digambarkan lebih kecekapan dan ketepatan dalam menjalankan fungsinya kerana saiznya yang lebih kecil. Ini adalah perbezaan antara T4 dan T7 ligase.
Muat turun Versi PDF T4 vs T7 DNA Ligase
Anda boleh memuat turun versi PDF artikel ini dan menggunakannya untuk tujuan luar talian mengikut nota petikan. Sila muat turun versi PDF di sini Perbezaan Antara T4 dan T7 Ligase.
