Perbezaan Utama – Halaman SDS lwn Halaman Asli
SDS dan halaman asli ialah dua jenis teknik elektroforesis gel poliakrilamida yang digunakan dalam Biologi Molekul. Perbezaan utama antara Halaman SDS dan Halaman Asli ialah jenis gel poliakrilamida yang digunakan. Dalam Halaman SDS gel denaturasi digunakan oleh itu, molekul diasingkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, dalam Native Page, gel tidak denaturasi digunakan. Oleh itu, molekul diasingkan berdasarkan saiz, cas dan bentuknya.
Polyacrylamide Gel Electrophoresis (Halaman) menggunakan gel yang dibuat dengan mempolimerkan monomer akrilamida dengan metilena bisakrilamida. Poliakrilamida lebih keras dan lebih stabil haba daripada agarose. Gel poliakrilamida mempunyai saiz liang yang lebih kecil yang membolehkan pemisahan protein yang cekap. Terdapat dua jenis tetapan Halaman utama iaitu Halaman SDS dan Halaman Asli. SDS Page atau Sodium-Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel elektroforesis mengasingkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel pendenatur digunakan dalam Halaman SDS. Native Page menggunakan gel tidak denaturasi dan mengasingkan protein berdasarkan saiz, cas dan bentuknya (konformasi 3D).
Apakah Halaman SDS?
SDS Page ialah teknik elektroforesis yang paling biasa digunakan untuk mengasingkan protein berdasarkan berat molekulnya. Gel dibuat dengan menambah SDS (Sodium dodecyl sulfate), yang merupakan detergen. SDS gigi palsu protein menjadi monomer. SDS ialah detergen anionik. Oleh itu, ia menambah cas negatif bersih kepada protein dalam julat pH yang luas. Apabila cas negatif bersih diberikan pada molekul protein, disebabkan oleh variasi cas, struktur kompleks dipecahkan. Disebabkan oleh cas negatif, protein menarik ke arah hujung positif. Oleh itu, molekul dengan berat molekul yang lebih rendah bergerak lebih cepat pada matriks gel dan boleh diperhatikan dekat dengan anod, manakala protein berat molekul yang lebih tinggi diperhatikan lebih dekat dengan telaga.
Rajah 01: Halaman SDS
SDS yang mengikat rantai polipeptida adalah berkadar dengan jisim molekul relatifnya. Oleh itu, jisim molekul juga boleh ditentukan melalui Halaman SDS. Pewarnaan gel SDS Page dilakukan dengan pewarnaan biru bromofenol. Aplikasi julat halaman SDS ke tahap yang lebih besar di mana ia boleh digunakan untuk menganggar jisim molekul relatif dan untuk menentukan kelimpahan relatif protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga boleh digunakan untuk menentukan taburan protein dalam campuran protein. Halaman SDS juga digunakan untuk membersihkan dan menilai protein. Ia digunakan sebagai prosedur awal untuk western blotting dan hibridisasi, yang seterusnya digunakan untuk pemetaan dan pengenalan protein.
Apakah Halaman Asli?
Elektroforesis gel Poliakrilamida Asli (Halaman Asli) menggunakan gel bukan pendenaturasi. Oleh itu, SDS atau mana-mana agen denaturasi lain tidak ditambah kepada matriks gel. Dalam Halaman Asli, pemisahan protein adalah berdasarkan cas dan saiz protein. Oleh itu, mobiliti protein bergantung pada cas dan saiz protein.
Caj protein bergantung pada rantai sampingan asid amino. Jika rantai sisi bercas negatif, protein akan menerima cas negatif keseluruhan dan begitu juga sebaliknya. Protein mengekalkan konformasi 3D disebabkan oleh lipatan yang berlaku. Lipatan terhasil daripada beberapa jenis ikatan dalam protein seperti ikatan disulfida, interaksi hidrofobik dan ikatan Hidrogen. Oleh itu, jika Halaman asli dibawa pada pH neutral, protein akan diasingkan mengikut bentuk molekul protein. Oleh itu, Halaman Asli boleh digunakan sebagai teknik sensitif untuk mengesan perubahan cas atau konformasi protein.
Kelebihan utama Halaman asli ialah protein yang digunakan untuk analisis Halaman boleh dipulihkan dalam keadaan asalnya selepas analisis Halaman, kerana protein tidak terganggu semasa proses. Native Page ialah teknik pemprosesan yang agak tinggi dan kestabilan protein meningkat.
Rajah 02: Halaman Asli
Setelah selesai menjalankan gel, gel Native Page boleh dilihat dengan mengotorkan dengan biru bromofenol atau sebarang reagen pewarna lain yang sesuai. Aplikasi Native Page termasuk pengasingan protein berasid termasuk glikoprotein seperti erythropoietin rekombinan manusia atau pengenalpastian protein yang terdapat dalam Bovine Serum Albumin (BSA).
Apakah Persamaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?
- Kedua-dua sistem Halaman SDS dan Halaman Asli menggunakan gel poliakrilamida sebagai matriks gel.
- Kedua-duanya digunakan untuk pengasingan dan pengenalpastian protein.
- Kedua-duanya menggunakan mobiliti elektroforesis untuk memisahkan sebatian.
- Kedua-duanya boleh dilakukan dalam cara menegak atau mendatar (kebanyakannya dilakukan sebagai persediaan Halaman menegak kerana panjang larian lebih panjang).
- Radas elektroforesis termasuk tangki gel, sikat, bekalan kuasa diperlukan untuk pengendalian kedua-dua teknik.
- Penggambaran gel boleh dilakukan dengan kaedah pewarnaan dalam kedua-dua teknik.
Apakah Perbezaan Antara Halaman SDS dan Halaman Asli?
Halaman SDS lwn Halaman Asli |
|
| SDS Page atau Sodium-dodecyl sulfate Page mengasingkan protein berdasarkan berat molekulnya, dan ia menggunakan gel denaturasi. | Halaman Asli menggunakan gel tidak denaturasi dan mengasingkan protein berdasarkan saiz, cas dan bentuknya (konformasi 3D). |
| Jenis Gel | |
| Gel denaturasi digunakan dalam halaman SDS. | Gel bukan denaturasi digunakan dalam halaman asli. |
| Kehadiran SDS | |
| SDS hadir sebagai detergen untuk memberikan caj negatif pada sampel dalam halaman SDS. | SDS tiada dalam halaman asli. |
| Asas Pemisahan | |
| Pemisahan protein bergantung pada berat molekul protein dalam halaman SDS. | Pemisahan bergantung pada saiz dan bentuk molekul protein dalam halaman asli. |
| Kestabilan Protein | |
| Kestabilan protein adalah rendah dalam halaman SDS. | Kestabilan protein tinggi dalam halaman asli. |
| Pemulihan Protein Asal | |
| Tidak mungkin kerana ia dinyahtutur dalam halaman SDS. | Mungkin pada halaman asli. |
Ringkasan – Halaman SDS lwn Halaman Asli
SDS Page dan Native Page ialah dua jenis teknik elektroforesis gel Poliakrilamida yang digunakan untuk memisahkan protein. Halaman SDS dirawat dengan detergen yang dipanggil SDS. SDS memberikan cas negatif keseluruhan kepada protein, yang kemudiannya mengakibatkan denaturasi protein. Oleh itu, protein dipisahkan berdasarkan berat molekulnya. Sebaliknya, teknik Native Page tidak menggunakan sebarang agen pendenatur. Oleh itu, protein sama ada dipisahkan berdasarkan saiz atau bentuknya. Ini ialah perbezaan antara halaman SDS dan halaman asli.
