Perbezaan Utama – Halaman SDS lwn Western Blot
Western blotting ialah teknik yang mengesan protein tertentu daripada sampel protein. Teknik ini dilakukan melalui beberapa langkah utama: elektroforesis gel, blotting, dan hibridisasi. Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS Page) ialah sejenis teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk mengasingkan protein mengikut saiznya (berat molekul). Western blot ialah helaian khas membran blotting yang digunakan untuk memindahkan corak protein yang sama dalam Halaman SDS. Perbezaan utama antara SDS Page dan western blot ialah SDS Page membenarkan pengasingan protein dalam campuran manakala western blot membolehkan pengesanan dan kuantifikasi protein tertentu daripada campuran. Kedua-duanya berguna dalam kajian analisis protein.
Apakah Halaman SDS?
SDS Page ialah teknik elektroforesis gel yang digunakan untuk pengasingan protein. Ia biasanya digunakan dalam biokimia, genetik, forensik dan biologi molekul. Sebaik sahaja protein diekstrak daripada sampel, ia dijalankan pada gel yang terdiri daripada SDS dan polyacrylamide. SDS ialah detergen anionik yang digunakan untuk menglinearkan protein (protein denatur) dan untuk memberikan cas negatif kepada protein terlinear berkadar dengan jisim molekulnya. Poliakrilamida menjadi sokongan padu untuk gel. Protein terdenatur yang bercas negatif berhijrah ke arah hujung positif radas melalui gel. Mengikut saiz protein, kelajuan penghijrahan berbeza antara protein dan pemisahan berlaku. Oleh itu, halaman SDS berguna untuk pengasingan protein individu berdasarkan saiznya.
Penyediaan gel poliakrilamida untuk pecahan protein merupakan langkah penting dalam Halaman SDS. Kepekatan polyacrylamide yang betul dan jenis agen penghubung silang yang digunakan sangat mempengaruhi sifat fizikal gel, yang menjadikan pemisahan sebenar protein yang berbeza. Saiz liang gel harus diurus dengan betul untuk pemisahan yang berkesan. Walau bagaimanapun, Halaman SDS dianggap sebagai teknik pemisahan protein resolusi tinggi.
SDS Teknik halaman mempunyai had utama dalam analisis protein. Memandangkan SDS mendenaturasi protein sebelum pemisahan, ia tidak membenarkan pengesanan aktiviti enzimatik, interaksi pengikat protein, kofaktor protein, dsb.
Rajah 01: Halaman SDS
Apakah itu Western Blot?
Teknik Western blotting membolehkan pengesanan protein tertentu daripada campuran protein dan pengukuran kuantiti dan berat molekul protein. Western blot ialah membran yang digunakan semasa prosedur blotting untuk mendapatkan imej cermin corak protein dalam gel SDS- polyacrylamide. Membran yang digunakan untuk western blotting kebanyakannya terdiri daripada nitrocellulose atau polyvinylidene difluoride (PVDF). Membran dengan protein yang dipindahkan boleh digunakan untuk mengenal pasti protein yang dikehendaki. Ia memerlukan antibodi berkualiti tinggi untuk pengesanan protein yang dikehendaki melalui hibridisasi. Antibodi mengikat antigen spesifiknya dan mendedahkan kehadiran antigen yang dikehendaki iaitu protein.
Pemindahan protein daripada gel polyacrylamide SDS ke western blot dilakukan dengan electroblotting. Ia adalah kaedah yang berkesan dan pantas yang menyebabkan protein menjadi elektroforesis daripada gel dan meresap ke membran nitroselulosa (western blot).
Rajah 02: Western Blot
Apakah perbezaan antara Halaman SDS dan Western Blot?
Halaman SDS lwn Western Blot |
|
| Halaman SDS ialah teknik elektroforesis gel. | Western blot ialah teknik yang dilakukan pada membran untuk mengesan protein tertentu daripada campuran. |
| Gunakan | |
| Halaman SDS membenarkan pemisahan protein mengikut saiznya. | Western blot membolehkan pemindahan protein pada gel halaman SDS tanpa mengubah coraknya & membenarkan penghibridan dengan antibodi tertentu. |
| Kekurangan | |
| Denaturasi protein, kos tinggi dan kehadiran bahan kimia neurotoksin adalah kelemahan teknik ini. | Teknik ini memakan masa dan memerlukan keadaan terkawal peribadi dan khusus yang berpengalaman yang baik. |
Ringkasan – Halaman SDS lwn Western Blot
Halaman SDS dan western blot ialah dua kaedah yang terlibat dalam analisis protein. Halaman SDS membolehkan pemisahan mudah protein pada gel mengikut berat molekulnya. Western blot membantu mengesahkan kehadiran dan kuantiti protein tertentu melalui hibridisasi dengan antibodi tertentu. Ini ialah perbezaan antara Halaman SDS dan western blot.
