Perbezaan Utama – ELISA Langsung vs Tidak Langsung
Enzim-linked immunoassay (ELISA), juga dikenali sebagai enzyme immunoassay, ialah ujian serologi yang mengesan antibodi dalam darah. Ia digunakan sebagai alat diagnostik untuk mengetahui sama ada pesakit telah terdedah kepada jenis virus tertentu atau agen berjangkit lain (antigen) dan sama ada badan telah menghasilkan antibodi terhadap jangkitan. ELISA juga boleh mengenal pasti jangkitan masa lalu dan semasa. Oleh itu, ELISA sering digunakan sebagai ujian prasaringan oleh doktor sebelum analisis mendalam penyakit. Ujian ini boleh dilakukan di makmal dengan mengambil sampel darah daripada pesakit. Terdapat dua jenis ujian ELISA: ELISA langsung dan ELISA tidak langsung. Perbezaan utama antara ELISA langsung dan tidak langsung ialah ELISA tidak langsung adalah lebih sensitif dan memerlukan penambahan antibodi sekunder manakala ELISA langsung kurang sensitif dan hanya menggunakan antibodi primer.
Apakah Direct ELISA?
ELISA ialah ujian diagnostik penyakit yang dijalankan untuk mengenal pasti kehadiran antigen atau antibodi tertentu dalam darah. Ia dilakukan sebagai ujian plat. Ia menggunakan antibodi yang dikaitkan dengan enzim yang mudah diuji. Kehadiran antigen dalam sampel serum mengikat dengan antibodi khusus yang dikaitkan dengan enzim. Pada langkah terakhir, substrat tertentu ditambah untuk bertindak balas dengan enzim. Enzim menukarkan substrat kepada produk berwarna atau menghasilkan isyarat. Perubahan warna dalam substrat kimia mendedahkan kehadiran antibodi tertentu dalam sampel serum. Ujian ELISA langsung hanya menggunakan antibodi utama yang dikaitkan dengan enzim. Apabila mengikat antigen, ia dengan cepat menukar warna, menunjukkan kehadiran agen berjangkit dalam darah. Walau bagaimanapun, keamatan isyarat adalah lebih lemah dalam ELISA langsung kerana epitop terhad kepada pengikatan antigen. Oleh itu, ELISA langsung kurang sensitif berbanding ELISA tidak langsung.
Rajah 01: Ujian ELISA Terus
Apakah ELISA Tidak Langsung?
ELISA boleh dilakukan menggunakan dua jenis antibodi iaitu; antibodi primer dan antibodi sekunder. Alat ELISA tidak langsung menggunakan kedua-dua jenis antibodi untuk menguatkan isyarat untuk pengesanan yang lebih baik. Teknik ELISA tidak langsung dilakukan seperti berikut.
- Pinggan diinkubasi dengan antigen dan dicuci untuk menyekat pengikatan tidak spesifik.
- Kemudian antibodi primer ditambah dan dicuci.
- Antibodi sekunder berkaitan enzim ditambah dan dicuci.
- Substrat ditambah dan dibenarkan bertindak balas dengan enzim.
- Isyarat dikesan, dan kehadiran atau ketiadaan antigen khusus dalam sampel dikenal pasti.
Dalam ujian ELISA tidak langsung, beberapa antibodi sekunder boleh mengikat satu antibodi primer. Antibodi sekunder dikaitkan dengan enzim yang mudah diuji. Oleh itu, satu pengikatan boleh membuat isyarat yang kuat kerana lebih daripada satu interaksi. Oleh itu, ELISA tidak langsung adalah lebih sensitif daripada ELISA langsung. Walau bagaimanapun, ELISA tidak langsung boleh membuat isyarat tidak spesifik disebabkan oleh tindak balas silang antibodi sekunder.
Rajah 02: Ujian ELISA Tidak Langsung
Apakah perbezaan antara ELISA Langsung dan Tidak Langsung?
ELISA Langsung lwn Tidak Langsung |
|
| ELISA Langsung kurang sensitif berbanding ELISA tidak langsung. | ELISA tidak langsung adalah lebih sensitif. |
| Masa yang Diambil | |
| Ujian ELISA langsung ialah proses yang pantas. | ELISA tidak langsung memakan masa. |
| Penggunaan Antibodi | |
| Hanya satu jenis antibodi (antibodi utama) digunakan dalam ELISA langsung. | Antibodi primer dan sekunder digunakan untuk ELISA tidak langsung. |
| Pautan dengan Enzim | |
| Antibodi utama dikaitkan dengan enzim. | Antibodi sekunder dikaitkan dengan enzim. |
| Kereaktifan Silang Antibodi Kedua | |
| ELISA langsung menghapuskan kereaktifan silang antibodi kedua. | ELISA tidak langsung terjejas dengan kereaktifan silang antibodi kedua. |
| Isyarat | |
| Isyarat lemah berbanding ELISA tidak langsung. | Isyarat dikuatkan dalam ELISA tidak langsung. Oleh itu, ia mudah dikesan. |
Ringkasan – ELISA Langsung lwn Tidak Langsung
ELISA ialah teknik biokimia yang digunakan terutamanya dalam imunologi untuk mengesan kehadiran antibodi atau antigen dalam sampel darah pesakit. Ia boleh dilakukan melalui dua proses yang dikenali sebagai ELISA langsung atau tidak langsung. Ujian ELISA langsung hanya menggunakan antibodi primer untuk mengesan antigen manakala ELISA tidak langsung menggunakan kedua-dua antibodi primer dan sekunder. Dalam ELISA langsung, antibodi primer dilabelkan manakala dalam ELISA tidak langsung antibodi sekunder dilabelkan. Ini ialah perbezaan antara ELISA langsung dan tidak langsung.
