Perbezaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung ialah imunofluoresensi langsung menggunakan antibodi tunggal yang berfungsi melawan sasaran yang diminati manakala imunofluoresensi tidak langsung menggunakan dua antibodi untuk melabelkan sasaran yang diminati.
Immunofluorescence atau pengimejan sel ialah teknik yang digunakan untuk melabel antigen sasaran tertentu dengan fluorophore. Di sini, fluorophore ialah sebatian kimia pendarfluor yang boleh memancarkan semula cahaya apabila pengujaan cahaya. Apabila fluorophore mengikat dengan antigen sasaran, ia membolehkan pengesanan molekul sasaran dalam sampel. Untuk menerangkannya dengan lebih lanjut, apabila antigen mengikat dengan antibodi tertentu, ia boleh dikonjugasikan dengan fluorofor. Oleh itu, adalah mudah untuk mengesan kehadiran antigen sasaran dalam sampel apabila memerhati di bawah mikroskop pendarfluor.
Selain itu, terdapat dua jenis imunofluoresensi; imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Perbezaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung terutamanya terletak pada bilangan antibodi yang digunakan dan konjugasi fluorofor. Iaitu, dalam imunofluoresensi langsung, fluorophore berkonjugasi terus kepada antibodi primer manakala dalam imunofluoresensi tidak langsung, fluorophore berkonjugat dengan antibodi sekunder.
Apakah Immunofluoresensi Langsung?
Imunofluoresensi menggunakan antibodi untuk mengesan antigen sasaran tertentu. Imunofluoresensi langsung adalah salah satu daripada dua jenis imunofluoresensi. Dalam imunofluoresensi langsung, antibodi tunggal (antibodi primer) melibatkan dan fluorophore berkonjugasi secara langsung dengan antibodi primer. Setelah mengikat antibodi dengan antigen sasaran, fluorophore memancarkan pendarfluor yang boleh dikesan oleh mikroskop pendarfluor.
Rajah 01: Immunofluoresensi Langsung
Walau bagaimanapun, imunofluoresensi langsung ialah kaedah yang mahal kerana antibodi terkonjugasi primer adalah mahal berbanding antibodi sekunder. Namun begitu, ia tidak melibatkan langkah tambahan justeru, teknik yang lebih pendek. Tambahan pula, pengikatan tidak spesifik dikurangkan dalam imunofluoresensi langsung. Oleh itu, kereaktifan silang spesies adalah rendah. Tetapi dalam pengesanan, sensitiviti imunofluoresensi langsung adalah lemah berbanding dengan imunofluoresensi tidak langsung.
Apakah itu Imunofluoresensi Tidak Langsung?
Imunofluoresensi tidak langsung ialah jenis imunofluoresensi kedua yang melibatkan dua jenis antibodi seperti antibodi primer dan sekunder dalam pelabelan antigen sasaran. Dalam kaedah ini, fluorofor bergabung dengan antibodi sekunder. Oleh itu, teknik ini melibatkan langkah tambahan.
Rajah 02: Imunofluoresensi
Walau bagaimanapun, sensitiviti adalah tinggi dalam kaedah ini kerana beberapa fluorofor boleh dikonjugasikan kepada antibodi sekunder dan ia memudahkan pengesanan. Tambahan pula, imunofluoresensi tidak langsung adalah lebih murah kerana fakta bahawa konjugasi antibodi sekunder lebih murah dan lebih mudah. Berbanding dengan imunofluoresensi langsung, kereaktifan silang spesies adalah tinggi dalam kaedah tidak langsung.
Apakah Persamaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung?
- Ia adalah dua jenis teknik imunofluoresensi.
- Antibodi utama dan fluorofor terlibat dalam kedua-dua kaedah.
- Selain itu, tindak balas antigen-antibodi berlaku dalam kedua-dua kaedah.
- Selain itu, imunofluoresensi langsung dan tidak langsung menggunakan mikroskop pendarfluor untuk pengesanan antigen.
Apakah Perbezaan Antara Imunofluoresensi Langsung dan Tidak Langsung?
Imunofluoresensi boleh secara langsung atau tidak langsung berdasarkan konjugasi fluorofor dengan antibodi yang digunakan. Dalam imunofluoresensi langsung, fluorophore bergabung dengan antibodi utama, iaitu antibodi tunggal yang terlibat dalam teknik ini. Berbeza dengan itu, dalam imunofluoresensi tidak langsung, fluorophore bergabung dengan antibodi sekunder, yang merupakan salah satu daripada dua jenis antibodi yang terlibat dalam teknik ini. Oleh itu, perbezaan utama antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung ialah jenis antibodi yang berkonjugasi dengan fluorophore.
Infografik berikut menyediakan perbandingan sebelah menyebelah perbezaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.
Ringkasan – Immunofluoresensi Langsung vs Tidak Langsung
Imunofluoresensi ialah teknik yang digunakan untuk mengesan kehadiran antigen tertentu dalam sampel. Teknik ini menggunakan antibodi khusus. Oleh itu, dalam hal ini, antibodi bergabung dengan fluorofor untuk mengesannya menggunakan mikroskop pendarfluor. Selain itu, terdapat dua jenis imunofluoresensi iaitu, imunofluoresensi langsung dan tidak langsung. Imunofluoresensi langsung melibatkan antibodi tunggal dan fluorofor yang terkonjugasi secara langsung kepada antibodi ini. Imunofluoresensi tidak langsung melibatkan dua antibodi; primer dan sekunder dan fluorofor terkonjugasi kepada antibodi sekunder. Oleh kerana beberapa antibodi sekunder boleh mengikat dengan antibodi primer dan beberapa fluorofor boleh bergabung dengan antibodi sekunder, imunofluoresensi tidak langsung adalah kaedah yang lebih sensitif daripada kaedah langsung. Tambahan pula, kaedah tidak langsung adalah lebih murah daripada kaedah langsung. Oleh itu, ini ialah perbezaan antara imunofluoresensi langsung dan tidak langsung.
