Perbezaan Utama – Probe vs Primer
Probe molekul ialah serpihan DNA atau RNA kecil yang mengecam jujukan pelengkap dalam DNA atau RNA dan membenarkan pengenalpastian jujukan sasaran. Primer adalah regangan kecil DNA atau RNA yang berfungsi sebagai titik permulaan untuk sintesis DNA. Primer dan probe berhibrid dengan nukleotida pelengkap DNA templat atau DNA sasaran. Walau bagaimanapun, perbezaan utama antara probe dan primer ialah primer diperlukan untuk replikasi DNA manakala probe diperlukan untuk pengesanan jujukan tertentu dalam DNA sampel.
Apakah Probe?
Probe ialah serpihan kecil DNA atau RNA yang digunakan untuk mengesan DNA atau RNA sasaran dalam sampel melalui hibridisasi molekul. Mereka juga dikenali sebagai penanda molekul. Panjang probe boleh berbeza-beza (100 hingga 1000 bes), dan nukleotida probe adalah pelengkap kepada bahagian jujukan sasaran. Untuk memudahkan pengesanan, probe dilabelkan dengan isotop radioaktif atau dengan pewarna atau antibodi pendarfluor. Probe mengikat dengan asas pelengkap urutan sasaran dan mendedahkan kehadiran DNA atau RNA sasaran dalam sampel. Terdapat dua kaedah utama pelabelan probe: pelabelan akhir dan terjemahan nama samaran. Prob dikategorikan kepada jenis yang berbeza termasuk probe DNA, probe RNA, probe cDNa dan probe oligonucleotides sintetik, dan ia disediakan menggunakan teknik yang berbeza.
Probe ialah alat penting dalam banyak bidang mikrob dan molekul seperti virologi, patologi forensik, ujian paterniti, cap jari DNA, pengesanan penyakit genetik, RFLP, sitogenetik molekul, hibridisasi in situ, dll.
Rajah 01: Probe berlabel pendarfluor yang digunakan dalam FISH untuk pengesanan patogen
Apakah itu Primer?
Primer ialah serpihan DNA atau RNA pendek yang berfungsi sebagai pemula untuk sintesis DNA. Enzim polimerase DNA menambah nukleotida kepada kumpulan 3' OH urutan primer dan mensintesis untaian baharu yang pelengkap kepada DNA templat. Primer adalah serpihan yang sangat pendek dengan panjang 18 hingga 20 nukleotida. Ia disintesis secara kimia di makmal untuk penguatan DNA in vitro (PCR). Primer boleh mempunyai sebarang jujukan nukleotida kerana ia direka oleh pengguna. Mereka disintesis untuk dipadankan dengan asas pelengkap DNA templat. Oleh itu, ia boleh mempunyai sebarang jujukan nukleotida. Primer adalah sangat penting untuk replikasi DNA kerana polimerase DNA tidak dapat mensintesis DNA baharu tanpa sekeping DNA yang sedia ada. Apabila mereka bentuk primer untuk PCR, perkara berikut perlu dipertimbangkan:
- Primer hendaklah mengandungi nukleotida pelengkap kepada hujung mengapit DNA yang ingin dikuatkan.
- Primer harus mempunyai suhu lebur antara 55 – 65 0C
- Kandungan G dan C hendaklah antara 50 hingga 60%.
Dua primer digunakan dalam PCR sebagai hadapan dan belakang untuk mereplikasi kedua-dua helai DNA sampel. Primer biasanya digunakan untuk melakukan penjujukan PCR dan DNA.
Rajah 02: Penyepuhlindapan primer dalam PCR
Apakah perbezaan antara Probe dan Primer?
Probe vs Primer |
|
| Probe ialah serpihan kecil DNA/RNA yang digunakan untuk mengesan kehadiran jujukan sasaran dalam sampel melalui hibridisasi molekul. | Primer ialah regangan kecil DNA atau RNA yang berfungsi sebagai titik permulaan untuk replikasi DNA. |
| Fungsi | |
| Ini mengesan kehadiran urutan tertentu dalam sampel DNA atau RNA. | Ini bertindak sebagai titik permulaan untuk sintesis DNA. |
| Panjang | |
| Panjang boleh berada dalam julat 100 – 1000 tapak | Panjang biasanya kira-kira 18 – 20 tapak |
| Mengikat dengan Urutan Pelengkap | |
| Probe berhibrid dengan asas pelengkap bagi jujukan sasaran | Primer anil dengan asas pelengkap bagi untaian DNA. |
| Pelabelan | |
| Prob dilabelkan untuk memudahkan pengesanan | Primer biasanya tidak dilabelkan |
| Gunakan dalam PCR | |
| Prob tidak digunakan dalam PCR | Primer digunakan dalam PCR |
Ringkasan – Probe vs Primer
Probe ialah serpihan kecil jujukan DNA atau RNA yang boleh dihibridkan dengan nukleotida pelengkap untuk mengesan jujukan sasaran dalam sampel. Probe dilabel secara radioaktif, imunologi atau pendarfluor untuk melihat kehadiran jujukan sasaran. Primer ialah serpihan DNA atau RNA yang sangat kecil yang bertindak sebagai titik permulaan untuk penguatan DNA in vitro. Polimerase DNA mengenal pasti primer kumpulan 3’ OH dan memulakan pembinaan untaian baharu yang pelengkap kepada templat. Probe dan primer berfungsi sama dengan menghibridkan dengan nukleotida pelengkap. Oleh itu, perbezaan utama antara probe dan primer ialah fungsi utamanya.
