Perbezaan Utama – Kromosom Berjalan lwn Melompat
Jalan kromosom dan lompat kromosom ialah dua alat teknikal yang digunakan dalam biologi molekul untuk mengesan gen pada kromosom dan pemetaan fizikal genom. Berjalan kromosom ialah teknik yang digunakan untuk mengklon gen sasaran dalam perpustakaan genomik dengan pengasingan berulang dan pengklonan klon bersebelahan perpustakaan genomik. Lompat kromosom ialah versi khas berjalan kromosom yang mengatasi titik putus kromosom berjalan. Berjalan kromosom hanya boleh menyusun dan memetakan panjang kecil kromosom manakala lompat kromosom membolehkan penjujukan sebahagian besar kromosom. Ini ialah perbezaan utama antara berjalan kromosom dan melompat kromosom.
Apakah itu Chromosome Walking?
Chromosome walking ialah alat yang meneroka kawasan jujukan kromosom yang tidak diketahui dengan menggunakan serpihan sekatan yang bertindih. Dalam berjalan kromosom, sebahagian daripada gen yang diketahui digunakan sebagai probe dan diteruskan dengan mencirikan panjang penuh kromosom yang akan dipetakan atau dijujukan. Ini pergi dari penanda kepada panjang sasaran. Dalam berjalan kromosom, hujung setiap serpihan yang bertindih digunakan untuk penghibridan bagi mengenal pasti urutan seterusnya.
Probe disediakan daripada kepingan akhir DNA klon dan ia disubklonkan. Kemudian mereka digunakan untuk mencari serpihan bertindih seterusnya. Semua urutan bertindih ini digunakan untuk membina peta genetik kromosom dan mencari gen sasaran. Ia adalah kaedah menganalisis panjang DNA dengan serpihan bertindih kecil daripada perpustakaan genomik yang dibina semula.
Teknik Berjalan Kromosom – Langkah
-
Pengasingan serpihan DNA yang mengandungi gen atau penanda yang diketahui berhampiran gen sasaran
- Penyediaan peta sekatan serpihan yang dipilih dan subklonan kawasan akhir serpihan untuk digunakan sebagai probe
- Hibridisasi probe dengan serpihan bertindih seterusnya
- Penyediaan peta sekatan serpihan 1 dan subklonan kawasan akhir serpihan 1 untuk digunakan sebagai probe untuk mengenal pasti serpihan bertindih seterusnya.
- Hibridisasi probe dengan serpihan bertindih seterusnya 2
- Penyediaan peta sekatan serpihan 2 dan subklonan kawasan akhir serpihan 2 untuk berfungsi sebagai probe untuk mengenal pasti serpihan bertindih seterusnya
Langkah di atas hendaklah diteruskan sehingga gen sasaran atau sehingga 3’ hujung jumlah panjang jujukan.
Rajah 01: Teknik Berjalan Kromosom
Berjalan kromosom ialah aspek penting sitogenetik dalam mencari SNP bagi banyak organisma dan menganalisis penyakit yang dihantar secara genetik dan mencari mutasi gen yang berkaitan.
Apakah itu Melompat Kromosom?
Lompat kromosom ialah teknik yang digunakan dalam biologi molekul untuk pemetaan fizikal genom organisma. Teknik ini diperkenalkan untuk mengatasi halangan berjalan kromosom yang timbul apabila mencari kawasan DNA berulang semasa proses pengklonan. Oleh itu, teknik lompat kromosom boleh dianggap sebagai versi khas berjalan kromosom. Ia adalah kaedah yang pantas berbanding dengan berjalan kromosom dan membolehkan memintas urutan DNA berulang yang tidak terdedah untuk diklon semasa berjalan kromosom. Lompatan kromosom mengecilkan jurang antara gen sasaran dan penanda diketahui yang tersedia untuk pemetaan genom.
Alat lompat kromosom bermula dengan pemotongan DNA tertentu dengan endonuklease sekatan khas dan pengikatan serpihan ke dalam gelung yang dikelilingi. Kemudian buku asas yang direka daripada jujukan yang diketahui digunakan untuk menyusun gelung yang dikelilingi. Primer ini membolehkan lompatan dan penjujukan dengan cara alternatif. Oleh itu, ia boleh memintas urutan DNA yang berulang dan berjalan dengan pantas melalui kromosom untuk mencari gen sasaran.
Penemuan kod gen untuk penyakit cystic fibrosis dilakukan menggunakan alat lompat kromosom. Digabungkan bersama, melompat dan berjalan kromosom boleh meningkatkan proses pemetaan genom.
Rajah 02: Melompat Kromosom
Apakah perbezaan antara Berjalan Kromosom dan Melompat?
Kromosom Berjalan lwn Melompat |
|
| Kromosom ialah alat yang digunakan dalam biologi molekul untuk pemetaan genom dan mengesan gen tertentu. | Lompat kromosom ialah alat yang digunakan untuk pemetaan fizikal genom dan penemuan pantas gen sasaran dalam kromosom. |
| Perbandingan Panjang Jujukan | |
| Hanya serpihan kecil boleh diklon dengan berjalan kromosom. | Panjang kromosom yang lebih besar boleh dipetakan dengan lompatan kromosom. |
| Mengklon DNA Berulang dalam Kromosom | |
| Teknik berjalan kromosom mempunyai kesukaran untuk berjalan melalui urutan DNA berulang yang terdapat dalam kromosom. | Ia membolehkan memintas urutan DNA berulang. Oleh itu, tiada kesukaran apabila menemuinya semasa penjujukan. |
| Faktor yang Mempengaruhi Proses | |
| Kejayaan proses bergantung pada saiz genom dan jarak yang mesti "dijalani" dari kedudukan genomik yang diketahui ke arah gen yang dikehendaki. | Kejayaan tidak bergantung pada saiz genom jarak dari penanda ke sasaran. |
| Kesan DNA Tidak Diklon | |
| Perjalanan kromosom boleh dihentikan oleh serpihan DNA yang tidak diklon. | Picolo not terendah yang boleh dimainkan ialah D4. |
| Memerlukan Urutan yang Diketahui | |
| Proses bermula dengan gen yang diketahui berhampiran sasaran. | Proses ini memerlukan serpihan yang diketahui untuk mereka bentuk primer. |
Ringkasan – Chromosome Walking vs Jumping
Chromosomal walking kerap digunakan apabila diketahui bahawa gen tertentu terletak berhampiran gen yang diklon sebelum ini dalam kromosom dan adalah mungkin untuk mengenal pastinya dengan pengasingan berulang klon genom bersebelahan daripada perpustakaan genom. Walau bagaimanapun, apabila kawasan DNA berulang ditemui semasa teknik berjalan kromosom, proses itu tidak boleh diteruskan. Oleh itu, teknik itu berhenti dari titik itu. Melompat kromosom ialah alat biologi molekul yang mengatasi had ini untuk memetakan genom. Ia memintas kawasan DNA berulang ini yang sukar diklon dan membantu dalam pemetaan fizikal genom. Ini ialah perbezaan utama antara berjalan dan melompat kromosom.
