Perbezaan Utama – Pengklonan lwn Pengklonan
Pengklonan dan Subkloning ialah prosedur biologi molekul yang mencipta sel atau organisma yang serupa secara genetik yang mengandungi DNA atau gen yang menarik. Pengklonan ialah teknik yang melibatkan penyisipan gen atau DNA yang berminat ke dalam vektor, replikasinya dalam bakteria perumah, dan penghasilan sel atau organisma yang merupakan salinan tepat dari susunan genetik. Subkloning ialah teknik yang melibatkan penyisipan gen yang diminati, yang telah dimasukkan ke dalam vektor, ke dalam vektor sekunder, replikasinya dalam bakteria perumah, dan penghasilan salinan sel atau organisma yang serupa secara genetik. Perbezaan utama antara pengklonan dan subklon ialah, dalam pengklonan, gen yang diminati, setelah diikat menjadi vektor, meneruskan proses pengklonan manakala, dalam subklonan, gen yang telah diklonkan yang diminati dipisahkan daripada vektor induk dan dimasukkan semula ke dalam vektor penerima dan teruskan proses.
Apakah Pengklonan?
Pengklonan ialah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang serupa secara genetik. Secara semula jadi, pengklonan berlaku dalam cara pembiakan aseks. Apabila tiada penggabungan atau pengubahan genetik, sel anak menerima susunan genetik yang sama daripada induk. Organisma prokariotik dan eukariotik mencipta klon melalui pembelahan binari, tunas, mitosis, dll. Dalam biologi molekul, gen pengklonan atau serpihan spesifik DNA ialah kaedah popular untuk mengkaji struktur dan fungsi bahagian DNA tertentu itu.
Objektif utama pengklonan molekul adalah untuk membuat berjuta-juta salinan sel atau organisma yang serupa secara genetik yang mengandungi serpihan DNA yang menarik (terutamanya gen). Ia mencipta organisma dengan salinan genetik yang tepat dari yang lain. Terutamanya, gen tertentu diklonkan dalam kajian molekul untuk mendapatkan maklumat struktur dan berfungsi dan untuk penjujukan DNA. Selain itu, untuk penghasilan protein atau produk tertentu dalam skala besar, pengklonan digunakan secara meluas.
Prosedur Pengklonan
Langkah asas prosedur pengklonan adalah seperti berikut.
- Pengenalpastian dan pengasingan gen yang diminati. (Penguatan gen yang diminati oleh PCR).
- Sekatan penghadaman Gen yang diminati (Restriction endonuclease memotong gen).
- Sekatan penghadaman DNA vektor. (DNA vektor juga dipotong menggunakan endonuklease sekatan yang sama).
- Pemasukan gen ke dalam vektor dan pembentukan molekul rekombinan.
- Transformasi vektor rekombinan kepada bakteria perumah.
- Pengasingan dan pengenalpastian bakteria yang diubah (vektor plasmid harus mengandungi gen yang boleh dipilih, selalunya gen rintangan antibiotik kepada bakteria yang telah diubah).
- Ekspresi gen rekombinan dalam hos.
Rajah_01: Prosedur Pengklonan
Apakah itu Subkloning?
Subcloning ialah prosedur memindahkan gen yang diminati daripada satu vektor ke vektor yang lain untuk melihat ekspresi gen bagi mendapatkan kefungsian gen yang dikehendaki. Dalam kaedah ini, dua vektor terlibat; iaitu, vektor induk dan vektor destinasi. Sisipan klon dialihkan semula ke dalam vektor kedua dalam subklon. Objektif pemindahan gen dari vektor pertama ke vektor kedua adalah untuk mendapatkan sesuatu yang tidak dapat dilakukan oleh vektor pertama atau untuk memisahkan gen semula dalam serpihan DNA yang telah diklon dan menyatakannya secara bersendirian. Enzim sekatan digunakan dalam prosedur ini pada mulanya.
Prosedur Subkloning
Langkah asas subkloning adalah seperti berikut.
- Dengan bantuan endonuklease sekatan, pemisahan DNA yang diminati dalam plasmid penderma (vektor induk).
- Penguatan DNA yang diminati menggunakan PCR.
- Pemurnian produk PCR (DNA yang diminati) oleh elektroforesis gel.
- Pembukaan plasmid penerima oleh endonuklease sekatan yang sama digunakan untuk memisahkan DNA yang diminati dalam plasmid induk.
- Pengikatan DNA yang diminati (gen) ke dalam plasmid penerima untuk mencipta plasmid subklon.
- Transformasi vektor subklon menjadi bakteria perumah yang kompeten.
- Pemeriksaan sel yang diubah.
- Pemurnian DNA plasmid dan penggunaan untuk penjujukan DNA atau ekspresi gen untuk mendapatkan produk yang diingini.
Subkloning dijalankan apabila mengasingkan satu gen daripada kumpulan gen yang diklon atau apabila gen yang diminati diperlukan untuk dipindahkan ke dalam plasmid yang berguna untuk melihat fungsi sebenar gen yang diminati.
Rajah_02: Prosedur Subkloning
Apakah perbezaan antara Pengklonan dan Subkloning?
Pengklonan lwn Pengklonan |
|
| Pengklonan ialah prosedur yang menghasilkan organisma atau sel yang serupa secara genetik. | Subkloning ialah prosedur memindahkan gen yang diminati daripada satu vektor ke vektor lain untuk melihat ekspresi gen bagi mendapatkan kefungsian gen yang dikehendaki. |
| Proses | |
| Asingkan DNA yang diminati daripada organisma dan dimasukkan ke dalam vektor sekali dan diklon | DNA yang telah diklon dipisahkan daripada vektor pertama dan dimasukkan ke dalam vektor kedua dan diklon. |
| Sisipkan Pergerakan melalui Vektor | |
| Tidak mengalihkan sisipan (DNA yang diminati) daripada satu vektor ke vektor yang lain. | Alihkan sisipan daripada vektor induk ke vektor destinasi. |
Ringkasan – Pengklonan lwn Pengklonan
Pengklonan mencipta sel atau organisma yang serupa secara genetik dengan gen yang dimasukkan atau DNA yang diminati. Ia diteruskan melalui pemisahan dan penyisipan DNA yang diminati ke dalam vektor dan ekspresi dalam bakteria perumah. Subkloning berkongsi langkah yang sama dengan pengklonan. Walau bagaimanapun, dalam subkloning, serpihan DNA yang telah diklon (gen minat) dimasukkan ke dalam vektor dan diubah menjadi bakteria perumah. Itulah perbezaan utama antara pengklonan dan subklonan.
