Perbezaan Utama – Kertas lwn Lapisan Nipis lwn Kromatografi Lajur
Kromatografi kertas, kromatografi lapisan nipis dan kromatografi lajur ialah tiga jenis teknik kromatografi. Perbezaan utama antara kromatografi kertas, kromatografi lapisan nipis dan kromatografi lajur adalah berdasarkan jenis fasa pegun yang digunakan dalam teknik kromatografi. Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegunnya, kromatografi Lapisan Nipis menggunakan alumina atau gel silika sebagai fasa pegunnya, manakala kromatografi lajur menggunakan lajur yang dibungkus dengan bahan matriks yang sesuai sebagai fasa pegunnya.
Dalam proses pengasingan dan pengenalpastian biomolekul seperti protein dan karbohidrat, kromatografi ialah teknik biofizikal penting yang digunakan. Kromatografi mengasingkan sebatian berdasarkan keterlarutan, saiz dan casnya. Berdasarkan mekanisme pemisahan, kromatografi menggunakan mekanisme seperti pertukaran ion, penyerapan, sekatan dan pengecualian saiz dan terdapat tiga teknik kromatografi; iaitu, kertas, lapisan nipis, dan kromatografi lajur. Kromatografi kertas adalah berdasarkan penjerapan pepejal-cecair dan keterlarutan sebatian, dan ia menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegun. Kromatografi lapisan nipis adalah berdasarkan penjerapan pepejal-cecair molekul. Ia mempunyai fasa pegun yang biasanya diperbuat daripada alumina atau gel silika dan fasa bergerak iaitu pelarut. Kromatografi lajur menggunakan lajur yang dibungkus dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutamanya berdasarkan saiz, pertalian atau casnya.
Apakah itu Kromatografi Kertas?
Kromatografi kertas ialah jenis kromatografi yang paling mudah digunakan dan ia tidak digunakan untuk penyelidikan yang meluas. Ia digunakan terutamanya di makmal pelajar untuk mengenal pasti biomolekul seperti asid amino dan karbohidrat yang terdapat dalam campuran. Kromatografi kertas menggunakan fasa pegun yang dibuat menggunakan kertas selulosa atau kertas penapis Whatman dan fasa bergerak yang biasanya disediakan menggunakan pelarut organik seperti n-butanol, dll. Fasa pegun tepu dengan air, menjadikan fasa pegun cair. Oleh itu, apabila sebatian dilihat dan dibiarkan berjalan dengan kehadiran fasa bergerak, bergantung kepada keterlarutan sebatian, ia dipisahkan. Oleh itu, selepas pembangunan kromatogram, pewarnaan boleh dilakukan untuk menentukan jangka panjang setiap sebatian. Oleh itu, faktor pengekalan boleh dikira.
Rajah 01: Kromatografi Kertas
Kromatografi kertas boleh dikelaskan lagi sebagai kromatografi kertas menaik dan kromatografi kertas menurun bergantung pada arah pelarut yang berjalan.
Apakah Kromatografi Lapisan Nipis?
Kromatografi lapisan nipis atau TLC ialah teknik yang biasa digunakan untuk mengenal pasti asid amino berbeza yang terdapat dalam campuran atau untuk mengenal pasti protein. Teknik pengasingan adalah berdasarkan penjerapan pepejal-cecair. Semasa kromatografi lapisan nipis, plat yang diperbuat daripada alumina atau gel silika digunakan sebagai fasa pegun. Campuran pelarut berbeza mengikut keperluan dan mungkin menggunakan kombinasi berbeza sebatian organik seperti n-butanol, asid asetik, dan air untuk menyediakan pelarut. Sebatian yang akan diasingkan dikesan pada plat dan direndam dalam campuran pelarut. Sebaik sahaja pelarut bergerak ke atas berdasarkan tindakan kapilari yang diberikan oleh plat, sebatian yang kelihatan pada plat juga bergerak bergantung kepada keterlarutan mereka dalam pelarut.
Rajah 02: Kromatografi Lapisan Nipis
Pengesanan tompok selepas kromatogram dijalankan melalui prosedur pewarnaan yang berbeza. Sesetengah menggunakan pewarnaan ninhidrin yang agak toksik kaedah pewarnaan. Kromatogram lapisan nipis moden menggunakan teknik pendarfluor untuk melihat kromatogram selepas larian. Bergantung pada jarak yang telah dilalui, masa pengekalan setiap kompaun boleh dikira. Ini boleh digunakan untuk mengenal pasti jenis sebatian yang diasingkan berdasarkan campuran yang digunakan. TLC digunakan terutamanya untuk mengenal pasti asid amino dalam campuran protein dan juga untuk mengasingkan pelbagai jenis monosakarida yang terdapat dalam campuran.
Apakah Kromatografi Lajur?
Kromatografi lajur ialah istilah umum yang digunakan untuk menerangkan banyak jenis teknik kromatografi yang menggunakan kaedah pemisahan berasaskan lajur. Dalam kromatografi lajur, lajur fizikal digunakan dengan bahan pembungkus untuk memisahkan sebatian. Pengasingan mungkin berdasarkan sifat fizikal berbeza yang ditunjukkan oleh sebatian. Sifat ini boleh menjadi cas, saiz, konformasi 3D dan kapasiti mengikat, dsb. Oleh itu, lajur yang dibungkus dengan bahan matriks bertindak sebagai fasa pegun dan penimbal basuh yang digunakan pada lajur bertindak sebagai fasa mudah alih.
Jika molekul diasingkan berdasarkan saiz, bahan pembungkus dibungkus dengan cara yang meninggalkan liang untuk sebatian melaluinya. Oleh itu, molekul yang lebih besar yang tidak dapat mengalir melalui liang-liang dicairkan terlebih dahulu, manakala molekul yang lebih kecil mengambil masa yang lebih lama untuk dicairkan.
Rajah 03: Kromatografi Lajur
Jika molekul dipisahkan berdasarkan casnya, fasa pegun akan mengandungi sama ada penukar anion atau kation yang mana sebatian akan tertarik berdasarkan casnya. Oleh itu semasa langkah mencuci, sebatian tidak terikat akan dielusi. Selepas menambah penimbal elusi, sebatian bercas terikat akan dielusi. Pengesanan eluen ini kebanyakannya berdasarkan teknik spektrofotometri.
Apakah Persamaan Antara Lapisan Nipis Kertas dan Kromatografi Lajur?
- Semua Lapisan Nipis Kertas dan Kromatografi Lajur tiga teknik digunakan untuk pengasingan biomolekul seperti asid amino, protein dan karbohidrat.
- Teknik Kromatografi Lapisan Nipis Kertas dan Lajur mempunyai fasa mudah alih dan fasa pegun.
- Lapisan Nipis Kertas dan Teknik Kromatografi Lajur menggunakan mekanisme biofizikal untuk pengasingan.
Apakah Perbezaan Antara Lapisan Nipis Kertas dan Kromatografi Lajur?
Kertas lwn Lapisan Nipis lwn Kromatografi Lajur |
|
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas ialah teknik kromatografi yang digunakan untuk mengasingkan sebatian berdasarkan penjerapan cecair-cecair dan keterlarutan sebatian. Ia menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegunnya. |
| Kromatografi Lapisan Nipis | Kromatografi lapisan nipis ialah satu lagi teknik kromatografi berdasarkan penjerapan pepejal-cecair molekul. Ia mempunyai fasa pegun yang diperbuat daripada alumina atau gel silika dan pelarut sebagai fasa bergerak, iaitu pelarut. |
| Kromatografi Lajur | Kromatografi lajur menggunakan lajur yang dibungkus dengan matriks yang digunakan untuk memisahkan molekul terutamanya berdasarkan saiz, pertalian atau casnya. |
| Fasa Pegun | |
| Kromatografi Kertas | Kertas yang diperbuat daripada nitroselulosa Whatman digunakan sebagai fasa pegun dalam kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapisan Nipis | Alumina atau Silika gel digunakan sebagai fasa pegun kromatografi lapisan nipis. |
| Kromatografi Lajur | Lajur yang dibungkus dengan bahan pembungkus yang sesuai digunakan sebagai fasa pegun dalam kromatografi lajur. |
| Fasa Mudah Alih | |
| Kromatografi Kertas | Pelarut berjalan ialah fasa mudah alih kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapisan Nipis | Pelarut berjalan ialah fasa mudah alih kromatografi lapisan nipis. |
| Kromatografi Lajur | Penimbal basuh ialah fasa mudah alih kromatografi lajur. |
| Mekanisme Digunakan untuk Pemisahan | |
| Kromatografi Kertas | Kromatografi kertas adalah berdasarkan penyerapan pepejal-cecair. |
| Kromatografi Lapisan Nipis | Kromatografi lapisan nipis adalah berdasarkan penyerapan pepejal-cecair. |
| Kromatografi Lajur | Kromatografi lajur adalah berdasarkan pengecualian saiz, cas dan bentuk. |
| Penimbal Elusi | |
| Kromatografi Kertas | Tidak diperlukan oleh kromatografi kertas. |
| Kromatografi Lapisan Nipis | Tidak diperlukan untuk kromatografi lapisan nipis. |
| Kromatografi Lajur | Diperlukan dalam kromatografi lajur. |
| Pengesanan | |
| Kromatografi Kertas | Mewarna dan dengan menentukan faktor Pengekalan. |
| Kromatografi Lapisan Nipis | Mewarna dan dengan menentukan faktor Pengekalan. |
| Kromatografi Lajur | Penentuan spektrofotometri. |
Ringkasan – Lapisan Nipis Kertas lwn Kromatografi Lajur
Kromatografi kertas, TLC dan kromatografi lajur ialah teknik pengasingan yang digunakan untuk mengasingkan biomolekul seperti protein, asid amino dan karbohidrat (terutamanya monosakarida). Kromatografi kertas menggunakan kertas selulosa sebagai fasa pegun, dan mekanisme pemisahan adalah berdasarkan penjerapan pepejal-cecair. TLC juga menggunakan mekanisme penjerapan pepejal-cecair. Molekul-molekul dipisahkan pada fasa pegun, bergantung kepada keterlarutannya dalam fasa bergerak. Kromatografi lajur menggunakan sifat fizikal seperti saiz, bentuk, cas dan berat molekul sebatian untuk diasingkan. Lajur yang dibungkus dengan bahan matriks bertindak sebagai fasa pegun, manakala penimbal basuh bertindak sebagai fasa pelarut. Ini ialah perbezaan antara lapisan nipis kertas dan kromatografi lajur.
